[发明专利]可实现多种致病菌同步检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，具体涉及一种能应用于不同种类食源性致病菌的可实现多种致病菌同步检测方法。

背景技术

免疫检测是目前生物学检测方法中用途最广泛的一种方法，通常用于疾病诊断，动植物生理活动研究、微生物鉴定、病理研究以及免疫研究等。传统的免疫检测方法有免疫沉淀反应、凝集反应、补体结合实验等。免疫检测通常采用免疫标记，如酶标记、荧光标记、放射性核素等，应用较广泛的是酶标记技术。

目前，虽然人们生活水平得到极大提高，但是食品卫生状态一直处于令人堪忧的境地，为检测各种致病菌，免疫检测技术在食品卫生安全方面彰显其重要性。

例如，夹心法酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）:将已知的特异抗体包装在固相载体（塑料板凹孔或纸片上），加入待检标本，标本中的抗原即可与载体上的抗原结合，洗去未结合的材料后加入该抗原的酶标记抗体，洗去未结合的酶标抗体，加底物显色，用酶免疫检测仪测量颜色的光密度，可定量测定抗原。这种ELISA检测体系中的酶标记只能采用对应抗原的酶标记抗体，虽然具有针对性，但是检测的致病菌单一，如涉及到多种致病菌时，需要分别检测，费时费力。

发明内容

有鉴于此，提供一种可实现多种致病菌同步检测方法，其可应用于多种致病菌的同时检测，达到快速检测的目的。

一种可实现多种致病菌同步检测方法，其包括如下步骤：

抗体包被微孔板；

以HRP标记伴刀豆球蛋白，形成酶标记复合物；

向包被有抗体的微孔板中加入待测样本反应，洗板、甩干后加入酶标记复合物，温育；

洗板温育后，向微孔板中加入底物，测定复合物中的酶作用于加入的底物后生成的有色物质光吸收值，根据该吸收值来确定待测抗原含量。

上述可实现多种致病菌同步检测方法中，通过HRP和伴刀豆球单白(即ConA)交联修饰得到伴刀豆球单白-HRP复合物，以下简称ConA-HRP复合物，具有酶标记二抗与细菌结合的能力，因此能应用于多种致病菌检测，由于该复合物与细菌的结合位点不同于抗体的结合位点，因此应用于夹心法检测细菌时能提高检测灵敏度。另外由于ConA-HRP复合物能与多种细菌结合，因此能应用于多种致病菌的同时检测，达到快速检测的目的。

附图说明

图1为本发明实施例的可实现多种致病菌同步检测方法原理示意图。

具体实施方式

以下将结合具体实施例和附图对本发明进行详细说明。

本发明实施例提供的可实现多种致病菌同步检测方法，其包括如下步骤：

S01：抗体包被微孔板；

S02：以HRP标记伴刀豆球蛋白，形成酶标记复合物；

S03：向包被有抗体的微孔板中加入待测样本反应，洗板、甩干后加入酶标记复合物，温育；

S04：洗板温育后，向微孔板中加入底物，测定复合物中的酶作用于加入的底物后生成的有色物质光吸收值，根据该吸收值来确定待测抗原含量。

具体地，所述抗体是细菌免疫制备的单克隆抗体，可来源于山羊、兔或小鼠等动物。抗体是细菌免疫制备的单克隆抗体，其免疫原是食源性致病菌，例如可以是但不限于沙门氏菌、大肠杆菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、空肠弯曲菌中的至少一种。所述伴刀豆球蛋白是从刀豆中提取出来的凝集素，所述凝集素是四聚体球蛋白，分子量为102,000，每个亚基（即为四聚体之一）含237个氨基酸残基，每个亚基分子量25,500，结合一个Ca²⁺和一个Mn²⁺，每个凝集素含一个糖结合部位。上述方法中，步骤S01和S02无先后顺序。

如图1所示，简略示意出上述方法的检测原理：预先将辣根过氧化酶（HRP）和伴刀豆球单白(ConA)交联修饰得到ConA- HRP复合物（即酶标记复合物），用抗体包被微孔板，洗涤后；加入待检测的抗原，再加入ConA- HRP复合物，利用伴刀豆球单白能与细菌上糖蛋白结合特点，在微孔板上形成能牢固结合的单克隆抗体（Ab）—细菌—ConA-HRP复合物，把多余的未结合上细菌的ConA- HRP复合物洗去后，加入适量的底物如TMB后，HRP把底物分解成有色物质，从而达到检测效果。本发明实施例的检测方法的检测灵敏度可达到10² cfu/mL。