[发明专利]花生过敏源蛋白的特征肽及其应用

权利要求书

1.一种花生过敏源蛋白的特征肽，其特征在于，氨基酸序列为DLAFPGSGEQVEK或NLPQQCGLR。

2.一种用于检测花生过敏源蛋白的内标物，其特征在于，氨基酸序列为IEKQAKDL*AFPGSGEQV*EKLIKNQ或QFKRELRNL*PQQCGL*RAPQRCD，其中L*和V*为碳氮全同位素标记的氨基酸。

3.一种液质联用检测花生过敏源蛋白的试剂盒，包括特征肽和内标物，其特征在于，所述特征肽的氨基酸序列为DLAFPGSGEQVEK或NLPQQCGLR，所述内标物的氨基酸序列为IEKQAKDL*AFPGSGEQV*EKLIKNQ或QFKRELRNL*PQQCGL*RAPQRCD，其中L*和V*为碳氮全同位素标记的氨基酸。

4.如权利要求3所述的试剂盒在检测花生过敏源蛋白中的应用。

5.一种液质联用检测花生过敏源蛋白的方法，包括：

(1)配制系列含花生过敏原蛋白的特征肽和同位素标记特征肽的标准溶液，利用液质联用进行分离检测，计算特征肽和同位素标记特征肽的峰面积比，线性回归得到方程Y＝kX+b，其中Y为特征肽和同位素标记特征肽的峰面积比，X为特征肽的浓度；

所述特征肽的氨基酸序列为DLAFPGSGEQVEK或NLPQQCGLR，所述同位素标记特征肽的氨基酸序列为DL*AFPGSGEQV*EK或NL*PQQCGL*R；

(2)取待测样品，与内标物混合溶于水后进行酶解，在相同条件下对酶解液利用液质联用进行分离检测，计算特征肽和同位素标记特征肽的峰面积比，根据所述方程得到酶解液中所述特征肽的浓度，最后计算得到样品中花生过敏源蛋白的含量。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述酶解的温度为35～37℃，时间为5～6h。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)和(2)中，所述液质联用的液相色谱条件为：色谱柱：Acquity BEH 300C18柱(1.7μm，2.1×100mm)；柱温：40℃；进样体积：5μL；流动相A：0.1％甲酸/水；流动相B：0.1％甲酸/乙腈；流速0.3mL/min；洗脱程序为：流动相B起始浓度为7％，8min内线性上升为25％，9min下降至7％并保持3分钟。

8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)和(2)中，所述液质联用的质谱分析条件为：电喷雾离子源电离模式：ESI+；毛细管电压：3.5kV；脱溶剂气温度：500℃；脱溶剂气流量：800L/min；锥孔反吹气流量：150L/h；碰撞室压力：7.0×10^-3mbar；低端分辨率1：2.77V；高端分辨率1：15.09V；离子能量1：0.1；低端分辨率2：2.80V；高端分辨率2：14.79V；离子能量2：0.6；离子源温度：150℃；提取器电压：3.0V；入口透镜电压：0.5V；出口电压：0.5V；碰撞梯度：4.0。

9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，酶解前，添加浓度为500～700mmol/L的二硫苏糖醇。