[发明专利]鱼脑磷脂提取物及其在制备免疫调节剂中的应用

说明书

鱼脑磷脂提取物及其在制备免疫调节剂中的应用，所述的鱼脑磷脂提取物通过下述方法制备：(1)制备鱼脑组织匀浆，添加5～10U/g木瓜蛋白酶，搅拌均匀，并调节混合物pH值为6～7，4℃冷藏4～6h；(2)室温条件下按1g匀浆:1～3ml溶剂向步骤(1)所得的混合物中加入溶剂，搅拌，静置十分钟后抽滤，收集滤液，脱水旋干得提取物I；所述溶剂为氯仿和甲醇按照体积比2:1～2的混合物；(2)将提取物I溶于氯仿后进行硅胶柱层析，以4～6倍柱体积的氯仿、2～4倍柱体积丙酮依次洗脱，然后用甲醇冲洗；(3)甲醇洗脱组分脱除溶剂，即得鱼脑磷脂提取物。所述提取物具有高的免疫调节活性。

技术领域

本发明涉及生物医药，具体地说是鱼脑磷脂在预防和治疗免疫低下中的应用；进一步说是鱼脑磷脂在制备预防和治疗免疫低下的药物或保健食品中的应用。

背景技术

恶性肿瘤，已经成为人类死亡的第一位或第二位原因，1996年以来全球每年新确诊肿瘤病人1000万以上，约有700万人死于癌症，恶性肿瘤大多发生于免疫力低下人群，因此市场和临床上对疗效好、毒副反应小、免疫激活保健品和药物需求量激增。

白细胞介素是由多种细胞产生并作用与多种细胞的一类免疫细胞因子。白细胞介素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用。目前至少发现了38种白介素，其中多种白介素参与机体免疫调节。例如巨噬细胞分泌的IL-1，能够与抗原协同作用，活化T细胞、促进B细胞生长和分化，吸引中性粒细胞，引起炎症介质释放；IL-2主要由T细胞产生，刺激NK细胞增殖，增强NK杀伤活性，目前IL-2已通过生物工程技术大量生产，在肿瘤治疗和提高免疫中起重要作用。此外，其他的白介素如IL-6、肿瘤坏死因子TNF-a均参与杀死和抑制肿瘤细胞作用。

由于肿瘤的顽固性，细胞毒性药物难以克服肿瘤细胞及瘤体内乏氧部分的抗药性，而通过改善患者的免疫状态却有其独特的优点。白细胞介素可以通过体液免疫、细胞免疫调节机体的免疫能力，激活巨噬细胞、NK细胞等免疫细胞的活性，间接杀伤肿瘤细胞，参与癌症的治疗，并且拮抗肿瘤患者由放疗和化疗导致的免疫抑制，因此不失为提高免疫力、抗肿瘤的新途径。

已有研究表明，鱼脑磷脂具有多种生物活性，包括免疫调节的作用。作为弃物利用的有效方式，鱼脑磷脂相关研究在吸引越来越多的关注。本发明的申请人长期从事鱼脑磷脂相关的研究工作，对鱼脑磷脂的提取方法及活性进行了系统而完整的探查。

发明内容

本发明的目的之一，在于提供一种鱼脑磷脂提取物，所述提取物通过下述方法制备：

(1)制备鱼脑组织匀浆，向其中添加5～10U/g木瓜蛋白酶，搅拌均匀，并调节混合物pH值为6～7，4℃冷藏4～6h；

(2)室温条件下，按1g匀浆:1～3ml溶剂的比例向步骤(1)所得的混合物中加入溶剂，搅拌，静置十分钟后抽滤，收集滤液，脱水旋干得提取物I；

所述溶剂为氯仿和甲醇按照体积比2:1～2的混合物；

(2)将提取物I溶于氯仿后进行硅胶柱层析，以4～6倍柱体积的氯仿、2～4倍柱体积丙酮依次洗脱(中性脂、糖脂和色素)，然后用甲醇冲洗；

(3)甲醇洗脱组分脱除溶剂，即得鱼脑磷脂提取物。

本发明另一方面的目的，在于提供上述提取物的制备方法，所述方法包括如下步骤：

(1)制备鱼脑组织匀浆，向其中添加5～10U/g木瓜蛋白酶，搅拌均匀，并调节混合物pH值为6～7，4℃冷藏4～6h；

(2)室温条件下，按1g匀浆:1～3ml溶剂的比例向步骤(1)所得的混合物中加入溶剂，搅拌，静置十分钟后抽滤，收集滤液，脱水旋干得提取物I；混合物与溶剂的比例优选1g:2ml；

所述溶剂为氯仿和甲醇按照体积比2:1～2的混合物；优选2:1；