[发明专利]一种猪繁殖与呼吸综合征病毒鉴别检测试剂盒及应用

权利要求书

1.一种用于猪繁殖与呼吸综合征病毒鉴别的特异性引物，其特征在于它是由下述引物组成：

PRRS-F      TTCCTGCACCGCGTAGAACTGTG       SEQ ID NO：1

PRRS-R     CTATTTTCCCGAGGATGCGTGGA       SEQ ID NO：2 。

2.一种含有权利要求1所述用于猪繁殖与呼吸综合征病毒鉴别的特异性引物组的检测试剂盒，其特征在于它的组成如下：

（1）PCR反应液（PB buffer）  700μL；

PCR反应液中含有：10×PCR（Mg²⁺Plus） buffer 2.5μL，dNTPs(2.5mM) 2.0μL，PRRS-F（100 pmol/μL）1.0μL，PRRS-R（100 pmol/μL）1.0μL

（2）超纯水  1.5mL；

（3）taq酶（5U/μL）  60μL；

其中的引物指的是：

PRRS-F      TTCCTGCACCGCGTAGAACTGTG       SEQ ID NO：1

PRRS-R     CTATTTTCCCGAGGATGCGTGGA       SEQ ID NO：2 。

3. 一种采用权利要求2所述试剂盒用于猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株、变异株、TJM- F92株的鉴别检测方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）扩增反应体系：扩增反应的总体积为25μL，其各种成分及终浓度分别为：PCR反应液（PB buffer） 6.5μL， taq酶（5U/μL）0.5μL，待检样品cDNA 3～7μL，超纯水11～15μL；

（2）扩增反应过程：94℃预变性5 min；94℃ 30 s，59℃ 30 s，72℃30 min，进行30个循环；72℃延伸10 min，4℃结束反应；

（3）扩增产物检测：扩增反应结束，取扩增产物5～7μL于1%琼脂糖进行凝胶电泳，电压100V，时间20～30min，根据电泳图像判断结果。

4.权利要求1所述用于猪繁殖与呼吸综合征病毒鉴别的特异性引物组在制备用于PRRSV经典株、变异株、TJM- F92株鉴别中的应用。

5.根据权利要求3所述用于猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株、变异株、TJM- F92株的鉴别检测试剂盒，其特征在于所述变异株为以江西株（JXA1R株）和湖南株（HUN4-F112株）为代表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株。