[发明专利]一种鉴定实蝇种类的集成流路芯片及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鉴定实蝇种类的集成流路芯片及其应用。

背景技术

实蝇(Fruit Flies)属双翅目(Diptera)实蝇科(Tephritidae)，全世界广泛分布，多发生在热带和亚热带地区。实蝇科约有500属4500种，具有重要经济意义的实蝇达250余种，有些实蝇对水果生产会造成毁灭性灾害。世界上具有经济重要性的实蝇主要有5个属，分别是按实蝇属(Anastrepha)、果实蝇属(Bactrocera)、小条实蝇属(Ceratitis)、寡鬃实蝇属(Dacus)和绕实蝇属(Rhagoletis)。

在我国现行的进境植物检疫性有害生物名录中，检疫性实蝇包含按实蝇属、果实蝇属、小条实蝇属、寡鬃实蝇(非中国种)、绕实蝇(非中国种)、欧非枣实蝇、枣实蝇、橘实锤腹实蝇、甜瓜迷实蝇及番木瓜长尾实蝇等10个种属；全国农业检疫性实蝇及林业检疫性实蝇分别各有1个种，即蜜柑大实蝇和枣实蝇；在农业部发布的国家重点管理外来入侵物种名录中，包括3种实蝇类害虫，分别为橘小实蝇、瓜实蝇和枣实蝇。

由于口岸截获的实蝇多为形态上难以区分的非成虫态，一般需经1-2周饲养为成虫后才能被准确鉴定，极大降低了检疫工作的时效性。传统的实蝇鉴定工作主要依靠形态学特征，但由于实蝇种类多，区分不同实蝇种类之间的形态学差别往往非常细微和复杂，有的种类还需借助分布和寄主信息才能区分，有的种类的分类地位仍较为混乱，且实蝇新属和新种的描述还在不断增加，特别是一些复合体种类的分类还存在争议，这些问题的存在都给实蝇传统形态鉴定带来了极大的阻碍。随着国际果蔬贸易的发展，实蝇类害虫传入我国的风险显著增加，其检疫鉴定特别是快速鉴定的需求愈发迫切。

集成流路(Integrated Fluidic Circuit，IFC)芯片是一种利用具有高弹性的聚二甲基硅氧烷材料，采用多层软刻蚀技术在芯片上设计并加工成高密度的微泵微阀结构，通过控制微泵微阀的关闭和开启，快速准确地将反应液分成若干独立的纳升量级反应单元，实现多步平行进行的通量高、体积小的PCR反应平台。

集成流体通路技术自出现以来，受到了科学界的格外青睐，该领域内的全球各大公司也相继推出了商业化产品。2006年，美国Fluidigm公司率先推出基于IFC技术的BioMark^TM基因分析系统，该系统是集成IFC技术、Real-Time PCR技术和基因分析软件相结合的技术平台，由BioMark^TM Real-Time PCR系统、IFC芯片、IFC控制器和数据分析软件4部分构成。其中，48.48IFC动态芯片可同时进行2304个实时荧光PCR反应。

目前，以IFC芯片为反应平台的多种PCR技术已在医学诊断、基因分型、单细胞基因表达、转基因检测、环境微生物检测、下一代测序等方面得到了广泛的应用，但其在昆虫分子鉴定方面的应用未见报道。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于鉴定实蝇种类的成套引物和探针。

本发明提供的用于鉴定实蝇种类的成套引物和探针由27个引物探针组组成。

上述成套引物和探针中，

所述引物探针组1为SEQ ID No.1所示的引物1-1、SEQ ID No.2所示的引物1-2和SEQ ID No.3所示的探针1组成；

所述引物探针组2为SEQ ID No.4所示的引物2-1、SEQ ID No.5所示的引物2-2和SEQ ID No.6所示的探针2组成；

所述引物探针组3为SEQ ID No.7所示的引物3-1、SEQ ID No.8所示的引物3-2和SEQ ID No.9所示的探针3组成；

所述引物探针组4为SEQ ID No.10所示的引物4-1、SEQ ID No.11所示的引物4-2和SEQ ID No.12所示的探针4组成；

所述引物探针组5为SEQ ID No.13所示的引物5-1、SEQ ID No.14所示的引物5-2和SEQ ID No.15所示的探针5组成；

所述引物探针组6为SEQ ID No.16所示的引物6-1、SEQ ID No.17所示的引物6-2和SEQ ID No.18所示的探针6组成；

所述引物探针组7为SEQ ID No.19所示的引物7-1、SEQ ID No.20所示的引物7-2和SEQ ID No.21所示的探针7组成；