[发明专利]一种生物碱二聚体及其制备方法与作为抗病毒剂的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物碱二聚体(alkaloid dimer)化合物及其制备方法与应用，特别是涉及一种对单纯疱疹I型病毒(HSV-1)和肠道病毒71(EV71)具有极强的抑制作用的生物碱二聚体及其制备方法与应用。

背景技术

单纯疱疹I型病毒是一种包裹着的DNA病毒，具有高发病率，潜伏期长，嗜神经组织的特点，潜伏于周围神经系统，主要感染儿童，免疫力低下者以及器官移植者，一旦受到外界适当刺激就会大规模爆发，引发脑炎和角膜炎，严重者能致人死亡。目前临床上抗病毒药物主要是核苷类抗生素，如阿昔洛韦，但近年来耐药性感染人群迅速增加。肠道病毒71是一种小的单正链RNA病毒，是引起儿童手足口病主要病原体，能够引起严重的神经系统并发症，导致婴儿和儿童不可逆的脑功能损伤甚至死亡。目前没有对EV71有效的疫苗和药物，临床治疗以对症、支持治疗为主。它们已经对人类的健康尤其是儿童的健康造成严重的影响。因此，寻找新的抗病毒药物尤其是结构新颖的抗病毒药物已成为亟待解决的课题。海洋微生物独特的生存环境(高压、高盐、缺氧、避光等)，促使海洋微生物产生大量结构新颖、具有抗病毒活性的化合物，为寻找潜在的抗病毒药物提供了重要来源。但是关于海洋微生物来源的具有抗HSV-1和EV71 活性的化合物的报道还相当少，尤其是具有潜在开发成为手性药物的海洋来源化合物的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种来源于海洋真菌的生物碱二聚体化合物及其制备方法与作为抗病毒剂的应用，它能满足现有技术的上述需求。菌种保藏信息：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏日期： 2012年12月17日；保藏编号：CGMCC NO. 6960；分类命名：Pestalotiopsis sp.。

本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐：

式I化合物选自下列化合物：

本发明提供式I化合物的制备方法，其特征在于先在菌种培养基中对真菌 Pestalotiopsis sp.(ZJ-2009-7-6)进行菌种培养，再在发酵培养基中对该真菌进行发酵培养，将所得菌丝体用氯仿-甲醇混合液(1∶1)浸提3次减压浓缩后，用乙酸乙酯萃取3次得粗浸膏；乙酸乙酯相粗浸膏分别进行正相硅胶柱层析、 Sephadex LH-20凝胶柱层析后，再经HPLC高效液相制备色谱，将所得洗脱液浓缩，即为式I化合物。

上述制备方法中菌种培养基优选含有葡萄糖0.1％-5.0％(重量百分比，下同)、酵母膏0.01％-1％、蛋白胨0.01％-1％、琼脂0.1％-3.0％、氯化钠0.05％-5％，其余为水，培养温度优选为0-30℃，培养时间优选为3-15天；发酵培养基优选含有大米1.0％-80.0％(重量百分比，下同)、氯化钠0.05％-5％，氯化钙0.01％-5％，溴化钾0.01％-5％，其余为水，培养温度优选为0-30℃，培养时间优选为20-100 天；所述的正相硅胶柱层析采用的固定相优选200-300目硅胶，流动相优选体积比为50％-100％的乙酸乙酯-石油醚混合溶剂；所述Sephadex LH-20凝胶柱层析采用的流动相优选体积比为氯仿∶甲醇＝1∶1的混合溶剂；所述HPLC高效液相制备色谱中采用的色谱柱：常规ODS C 18柱，优选为Kromasil 10×250mm，5μm，流速优选为1.0-5.0mL/min，流动相优选体积比为20％-70％的甲醇-水混合溶剂；手性柱，优选Kromasil系列手性柱，Kromasil 10×250mm，5μm，流速优选为 1.0-5.0mL/min，流动相优选体积比为40％-95％的无水乙醇-正己烷混合溶剂。

本发明的另一实施方案提供式I化合物的晶体，晶体数据：空间群为P-1，晶胞参数为α＝106.75(3)°，β＝ 97.22(3)°，γ＝95.45(3)°，Z＝2，Dc＝1.358g/cm³，F(000)＝532，μ＝0.106mm^-1。

本发明的另一实施方案提供上述式I化合物晶体的制备方法，其特征在于将式I化合物溶于甲醇、乙醇、水、四氢呋喃或丙酮中的任一种或几种，静置缓慢结晶即可得到式I化合物的晶体。

上述晶体的制备方法中静置缓慢结晶的条件优选在0-30℃下，静置1-30 天。