[发明专利]一种用于病毒基因组核酸提取试剂盒及其方法

权利要求书

1.一种用于提取病毒基因组核酸的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由蛋白酶K、硅基修饰磁珠、提取缓冲液、漂洗液I、漂洗液II及无RNA酶水组成；所述试剂盒配套含有磁力架；

其中，所述提取缓冲液由硫氰酸胍、十六烷基三甲基溴化铵、聚乙烯吡咯烷酮K25、Tris-HCl、EDTA以及NaCl组成；

所述提取的病毒基因组核酸，经超微量分光光度计检测，其A260/A280比值大于1.8；A260/A230的比值大于2.0；超微量分光光度计检测50μl脱落细胞液提取的核酸效率达到50μg/ml以上。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，各组成分别为：

1)蛋白酶K：为10-100mg/ml蛋白酶K，1ml/支；

2)硅基修饰微球G：1-100mg/ml，1μm硅基修饰微球，1ml/支；

3)提取缓冲液：1-20M硫氰酸胍；1-5％(wt)十六烷基三甲基溴化铵；0.5-5％(wt)聚乙烯吡咯烷酮K25；pH为5.5的100mM Tris-HCl；pH为5.5的25mM EDTA；2.0M NaCl；20ml/瓶；

4)漂洗液I：70％乙醇，30ml/瓶；

5)漂洗液II：96％乙醇，60ml/瓶；

6)RNase-Free去离子H₂O：10ml/瓶；

所述试剂盒并配置1个磁力架，可用于样本的50次病毒基因组核酸提取，并可组成100次、200次和500次病毒基因组核酸提取试剂盒；其含使用说明书一份，试剂盒保存在4℃冰箱。

3.根据权利要求1-2任一项所述试剂盒，其特征在于，提取缓冲液优选含有4M硫氰酸胍。

4.根据权利要求1-2任一项所述试剂盒，其特征在于，提取缓冲液优选含有2％十六烷基三甲基溴化铵和2％聚乙烯吡咯烷酮K25。

5.一种用于提取病毒基因组核酸的试剂盒，其特征在于，其制备方法如下：

1)蛋白酶K，取100mg蛋白酶K干粉，加入1-10ml灭菌的ddH₂O，颠倒混匀，制备成10-100mg/ml浓度，分装到1ml无菌塑料管中，每管1ml，存放于-20℃冰箱中备用；

2)硅基修饰微球G，取100mg/ml硅基修饰微球G原液1ml，加入1×PBS稀释，颠倒混匀，制备成1-100mg/ml浓度，分装到1ml无菌塑料管中，每管1ml，存放于4℃冰箱中备用；

3)提取缓冲液1：60.55g Tris碱溶于400ml ddH2O中，用HCl调pH值5.5，用ddH₂O定容至500ml，经121℃，100千帕压强下灭菌20分钟配制成1mol/L Tris-HCl；

186.10g EDTA-Na盐磁力搅拌溶于400ml ddH₂O中，用NaOH调pH值5.5，用ddH₂O定容至500ml，经121℃，100千帕压强下灭菌20分钟配制成1mol/L EDTA；

292.2g NaCl溶于400ml ddH₂O中，定容至500ml，经121℃，100千帕压强下灭菌20分钟配制成10mol/L NaCl；

分别取1mol/L Tris-HCl 5ml、1mol/L EDTA 12.5ml、0.2mol/L NaCl100ml、59g-1180g硫氰酸胍、10g十六烷基三甲基溴化铵和10g聚乙烯吡咯烷酮K25，用灭菌的ddH₂O定容至500ml，配制成提取缓冲液；分装到20ml无菌塑料瓶中，每瓶20ml；

4)漂洗液I：取700ml分析纯无水乙醇至1000ml无菌玻璃瓶中，加300ml灭菌的ddH₂O，颠倒混匀，配制成70％乙醇漂洗液I，分装至50ml无菌塑料瓶中，每瓶30ml；

5)漂洗液II：取960ml分析纯无水乙醇至1000ml无菌玻璃瓶中，加40ml灭菌的ddH₂O，颠倒混匀，配制成96％乙醇漂洗液II，分装至100ml无菌塑料瓶中，每瓶60ml；

6)去离子超纯水(ddH₂O)，电阻率大于18MΩ*cm，每600mL水中加入600uL焦碳酸二乙酯DEPC，配成DEPC水，摇床过夜；次日，经121℃，100千帕压强下灭菌20分钟处理；分装至10ml无菌塑料瓶中，每瓶10ml；

所述试剂盒配置1个磁力架，用于样本的50次病毒基因组核酸提取，并可组成100次、200次和500次病毒基因组核酸提取试剂盒，其含使用说明书一份，试剂盒保存在4℃冰箱，有限期1年。