[发明专利]海蜇来源的生物活性肽及其制备方法

权利要求书

1.一种海蜇来源的生物活性肽，其特征是其序列如下：Val-Gly-Pro-Tyr。

2.根据权利要求1所述的一种海蜇来源的生物活性肽的制备方法，其特征是它包括如下步骤：（1）海蜇蛋白酶解产物的制备；海蜇用海产品水解专用酶酶解，经超滤和纳滤脱盐冻干得海蜇蛋白酶解产物；（2）生物活性肽的分离纯化；将海蜇蛋白酶解产物采用Sephadex LH-20凝胶色谱柱层析，高效液相色谱分离纯化得到一个新的四肽，体外活性显示其具有较好的ACE抑制活性。

3.根据权利要求2所述一种海蜇来源的生物活性肽的制备方法，其特征是所述海蜇蛋白酶解产物的制备包括如下步骤：将三矾海蜇洗净除去泥沙等杂质，切块，加入10倍量水，浸泡5―6小时，用清水洗涤后，重复上述操作三次，沥干后加适量水打浆，加水至10倍量，加入4%，以底物蛋白含量计，w/w%；海产品水解专用酶调整pH 至8.0，温度55℃水解4.5 h，100℃加热10 min灭酶后，4000转/分离心15 min，取上清液；

采用分子量为5000 Da的超滤膜对上清液进行超滤处理，收集分子量小于5000 Da的部分，再进行纳滤处理脱盐，纳滤条件：进膜压力11 Bar，出膜压力11 Bar；截留液进行冷冻干燥，冷冻干燥条件：温度控制条件：0―50 min，0℃升至20℃；50―300 min，20℃；300―350 min，20℃升至40℃；350―750 min，40℃；750―800 min，40℃降至20℃；真空度为40 pa，温度-30℃，最终得到海蜇蛋白酶解产物。

4.根据权利要求2所述的一种海蜇来源的生物活性肽的制备方法，其特征是生物活性肽的分离纯化包括如下步骤：

（1）Sephadex LH-20凝胶色谱柱层析；

取海蜇蛋白酶解产物用蒸馏水溶解成200 mg/ml溶液，Sephadex LH-20凝胶色谱柱2.0 cm×60 cm进行分离纯化，流动相为蒸馏水，洗脱速度为0.6 ml/min，220 nm测定吸光度，收集各峰，冻干备用；

（2）高效液相色谱的分离纯化；

用高效液相色谱进一步分离纯化；色谱条件如下：色谱柱为反相C18键合硅胶柱Waters Atlantis, T3, 250 mm×4.6 mm, 5 μm；流动相：A水，B乙腈；流速：1.0 ml/min，柱温30℃，检测波长为220 nm和280 nm，收集主要色谱峰，冻干备用得到短肽样品。