[发明专利]一种辅助检测大豆胞囊线虫抗性的方法及专用引物

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种辅助检测大豆胞囊线虫抗性的方法及专用引物。

背景技术

大豆胞囊线虫病(soybean cyst nematode，SCN)是危害世界大豆(Glycine max L.Merr)生产的重要病害，属于多基因控制的复杂数量性状，种植抗病品种、合理轮作非寄主作物是当前防治大豆胞囊线虫病经济有效的措施。由于SCN抗性基因在遗传上的复杂性和大豆胞囊线虫生理小种的多样性(Riggs and Schmidt 1988；Caviness1992)，利用传统育种方法培育抗大豆胞囊线虫病的品种不但需要花费很长的时间，而且难于成功，不能够满足当前抗线育种的发展，急需一种更为准确、高效的鉴定SCN的方法。随着分子标记的开发和使用，分子标记辅助选择(Molecular marker-assisted selection，MAS)成为可以节约人力、物力和加速育种进程的有效方法(Cregan et al.1999)。MAS的最大优点是在不需要评估表型特征的情况下，通过确认是否带有目标基因而鉴定出抗性植株。

rhg1和Rhg4是控制大豆胞囊线虫病抗性的两个主效基因。Liu等(2012，Nature)利用图位克隆方法克隆了Rhg4位点GmSHMT基因，该基因编码了一种丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)，调控丝氨酸和甘氨酸相互转化，突变体分析、基因沉默和转基因互补实验等皆证明该基因与抗性相关。Liu等(2012，Nature)通过对28份具有代表性的大豆资源GmSHMT基因测序发现，1个非同义突变SNP位点Rhg4-389(G/C)可能与大豆胞囊线虫抗性相关。酶切扩增多态性序列(Cleaved Amplified Polymorphic Sequence，CAPS)标记是一种利用特异引物PCR与限制性酶切相结合而产生的一种检测SNP位点的DNA标记。具有共显性、位点特异性、操作简单和成本低等特点，已广泛用于作物的分子鉴定、基因定位、图位克隆和辅助育种等。

发明内容

本发明的一个目的是提供检测待测大豆胞囊线虫抗性的引物对。

本发明提供的引物对，由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成。

上述引物对中，所述序列表中序列1所示的单链DNA分子和所述序列表中序列2所示的单链DNA分子的摩尔比为1：1，且独立包装；

所述大豆胞囊线虫为大豆胞囊线虫3号生理小种。

含有上述引物对的PCR试剂也是本发明保护的范围。

上述的PCR试剂中，上述引物对的各条引物在所述PCR试剂中的终浓度均为2μmolL^-1；

所述大豆胞囊线虫为大豆胞囊线虫3号生理小种。

含有上述引物对或上述PCR试剂的试剂盒也是本发明保护的范围。

上述试剂盒中，所述大豆胞囊线虫为大豆胞囊线虫3号生理小种。

上述引物对或上述PCR试剂或上述的试剂盒在检测待测大豆胞囊线虫抗性中的应用也是本发明保护的范围；

或上述引物对或上述PCR试剂或上述的试剂盒在制备检测待测大豆胞囊线虫抗性产品中的应用也是本发明保护的范围；

所述大豆胞囊线虫具体为大豆胞囊线虫3号生理小种。

本发明另一个目的是提供一种检测或辅助检测待测大豆胞囊线虫抗性的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：

1)用上述引物对对待测大豆进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；

2)BsrBI酶切所述PCR扩增产物，得到酶切产物；

检测酶切产物，

若所述酶切产物中有237bp和132bp大小的片段，则所述待测大豆抗或候选抗大豆胞囊线虫，若所述酶切产物中没有237bp和132bp大小的片段，则所述待测大豆不抗或候选不抗大豆胞囊线虫。

上述方法中，所述大豆胞囊线虫为大豆胞囊线虫3号生理小种。

上述方法中，所述PCR扩增的模板为待测大豆的基因组DNA。

本发明的实验证明，本发明设计了引物可以特异鉴定抗大豆胞囊线虫3号生理小种大豆，灵敏度高，准确率高，能够极大的提高育种过程中材料的选择效率，对育种材料进行筛选。

附图说明

图1为引物对1扩增产物的酶切产物琼脂糖凝胶电泳的示意图。

图2为引物对2扩增产物的酶切产物PAGE电泳的示意图。

具体实施方式