[发明专利]一种用于绵羊肉用性能分子选种的PCR-SSCP试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于绵羊肉用性能分子选种的PCR-SSCP试剂盒。

背景技术

绵羊肉用性能（产肉量）是重要的经济性状，检测并选留具有优良肉用性能的绵羊可以显著提高养殖户经济效益。随着现代生物技术的发展，利用分子遗传学方法能够准确检测并选留具有优良肉用性能的绵羊。基于动物DNA序列影响表型性状的基本生物学原理，应用现代分子遗传学方法，寻找鉴定影响绵羊肉用性能的高效特异等位基因是评价绵羊肉用性能的有效手段之一。绵羊肉用性能（产肉量）是数量性状，受微效多基因调控，也有效应较大的主基因（Major gene）。目前，检测影响绵羊肉用性能的基因大多数为微效基因，而微效基因数量大且并非随机分布，通过检测微效基因评估绵羊肉用性能的准确性不高，多个微效基因的检测结果可能互相冲突且费时费力。而通过寻找和分析效应较大的主基因DNA序列，检测影响绵羊产肉性能的主基因特异等位基因，可以有效提高绵羊肉用性能评估的准确性，缩短绵羊肉用性能改良进程，进而提高绵羊个体经济效益。

发明内容

本发明提供了一种用于绵羊肉用性能分子选种的PCR-SSCP试剂盒，采用绵羊肉用性能分子标记选种技术，主要针对特异主效基因FABP4，利用PCR-SSCP技术检测特异等位基因，然后根据检测结果评估携带不同等位基因个体的肉用性能等级，从而判断是否留做种用。

绵羊FABP4基因定位于9号染色体，包括4个外显子和3个内含子，经试验验证，其是影响绵羊肉质性状的主要候选基因之一。绵羊FABP4基因具有丰富的变异，而剖析各个等位基因对肉用性能的影响程度有利于开发DNA标记物。

本发明提供一种用于绵羊肉用性能分子选种的PCR-SSCP试剂盒，所述试剂盒包括绵羊FABP4*A和FABP4*B的标准DNA样本，所述FABP4*A标准DNA样本的核苷酸序列参见序列表中SEQ ID No.1，所述FABP4*B标准DNA样本的核苷酸序列参见序列表中SEQ ID No.2。

本发明的第二个目的是提供一种检测和鉴别绵羊肉用性能的PCR-SSCP试剂盒，所述试剂盒包括绵羊FABP4等位基因，所述FABP4等位基因包括FABP4*A标准DNA样本、FABP4*B标准DNA样本、FABP4*C标准DNA样本、FABP4*D标准DNA样本和FABP4*E标准DNA样本，所述FABP4*A标准DNA样本的核苷酸序列参见序列表中SEQ ID No.1，所述FABP4*B标准DNA样本的核苷酸序列参见序列表中SEQ ID No.2，所述FABP4*C标准DNA样本的核苷酸序列参见序列表中SEQ ID No.3，所述FABP4*D标准DNA样本的核苷酸序列参见序列表中SEQ ID No.4，所述FABP4*E标准DNA样本的核苷酸序列参见序列表中SEQ ID No.5。

本发明的第三个目的是提供用于绵羊肉用性能分子选种的PCR-SSCP试剂盒的使用方法，步骤如下：

（1）收集并处理待测样本DNA；

（2）待测样本DNA的PCR扩增：

所用引物为：上游引物Up: TGTGGGCTTTGCTACCAG；下游引物Dn：ACTTAGATGAAGGTGCTCTG；

反应条件为：预变性95℃ 5分钟，变性94℃ 30秒，退火温度60℃ 30秒，延伸温度72℃ 45秒，最后延伸温度72℃ 10分钟；

（3）SSCP电泳：将绵羊FABP4*A和FABP4*B标准DNA样本与待测样本DNA同时进行SSCP电泳，待测样本带型与FABP4*A标准DNA样本带型一致的为高产肉性能绵羊品种，与FABP4*B标准DNA样本带型一致的为产肉性能良好的绵羊品种。

本发明的第四个目的是提供用于检测和鉴别绵羊肉用性能的PCR-SSCP试剂盒的使用方法，步骤如下：

（1）收集并处理待测样本DNA；

（2）待测样本DNA的PCR扩增：

所用引物为：上游引物Up: TGTGGGCTTTGCTACCAG；下游引物Dn：ACTTAGATGAAGGTGCTCTG；

反应条件为：预变性95℃ 5分钟，变性94℃ 30秒，退火温度60℃ 30秒，延伸温度72℃ 45秒，最后延伸温度72℃ 10分钟；