[发明专利]一种酶纳米复合物及其可控自组装方法和在免疫分析中的应用

权利要求书

1.一种酶纳米复合物，其特征在于：包括位于核心层的纳米颗粒，位于中间层的生物素及位于外层的亲和素修饰的酶；其中所述纳米颗粒为由M个相同或同源的亚基通过自组装形成的球形纳米颗粒，每个纳米颗粒通过遗传修饰表面均匀连接M个生物素，所述M≥12，且M为整数。

2.如权利要求1所述的复合物，其特征在于：所述纳米颗粒为蛋白纳米颗粒。

3.如权利要求2所述的复合物，其特征在于：所述蛋白纳米颗粒为铁蛋白纳米颗粒，其中每个铁蛋白纳米颗粒通过遗传修饰表面均匀连接24个生物素。

4.如权利要求3所述的复合物，其特征在于：所述复合物为单体，所述单体表面修饰有24个酶分子。

5.如权利要求3所述的复合物，其特征在于：所述复合物为多聚体，所述多聚体为二聚体至十聚体。

6.如权利要求1所述的复合物，其特征在于：所述酶为辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化酶或碱性磷酸酶。

7.如权利要求1-6任一项所述的复合物，其特征在于：所述每个纳米颗粒通过遗传修饰表面均匀连接M个生物素包括：

通过分子克隆在所述纳米颗粒亚基的N末端融合生物素接受多肽得到融合蛋白基因，将所述融合蛋白基因克隆入表达载体；

将生物素蛋白连接酶克隆入共表达载体中；

将所述表达载体、共表达载体转入表达宿主中培养，活化至对数生长期后加入诱导表白蛋白和生物素；

经破碎、纯化后制得生物素化的纳米颗粒。

8.如权利要求7所述的复合物，其特征在于：通过分子克隆在所述纳米颗粒亚基的N末端融合连接多肽之后再融合生物素接受多肽得到融合蛋白基因。

9.如权利要求7所述的复合物，其特征在于：所述表达载体和所述共表达载体为质粒载体，所述表达宿主选自大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、棒状杆菌、酿酒酵母、毕赤酵母或哺乳动物细胞。

10.如权利要求9所述的复合物，其特征在于：所述表达载体为pET-28、pET-32、pET-15或pET-11，所述共表达载体为pCDFDuel-1，所述表达宿主为大肠杆菌。

11.如权利要求7所述的复合物，其特征在于：所述克隆通过链式酶聚合反应完成。

12.一种如权利要求1-11任一项所述复合物的可控自组装方法，其特征在于：通过遗传修饰制备生物素化的纳米颗粒，将所述生物素化的纳米颗粒与亲和素修饰的酶混合，其中，所述纳米颗粒为由M个相同或同源的亚基通过自组装形成的球形纳米颗粒，每个纳米颗粒通过遗传修饰表面均匀连接M个生物素，所述M≥12，且M为整数；通过调整所述生物素化的纳米颗粒与亲和素修饰的酶的比例得到酶纳米复合物。

13.如权利要求要求12所述的方法，其特征在于：所述纳米颗粒为铁蛋白纳米颗粒，每个铁蛋白纳米颗粒通过遗传修饰表面均匀连接24个生物素，生物素化的铁蛋白纳米颗粒与亲和素修饰的酶按物质的量比为1：20～30。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于：所述生物素化的铁蛋白纳米颗粒与亲和素修饰的酶按物质的量比为1：20～23.5。

15.一种用于免疫分析的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括如权利要求1-11任一项所述的酶纳米复合物。

16.一种用于免疫分析的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括生物素化的纳米颗粒以及亲和素修饰的酶，所述纳米颗粒为由M个相同或同源的亚基通过自组装形成的球形纳米颗粒，每个纳米颗粒通过遗传修饰表面均匀连接M个生物素，所述M≥12，且M为整数。

17.一种如权利要求1-11任一项所述的酶纳米复合物在免疫分析中的应用。