[发明专利]用于核酸结合物的具有内涵体溶解剂的优化的体内递送系统

说明书

本申请是国际申请日为2011年6月21日、国际申请号PCT/EP2011/060280于2012年12月24日进入中国国家阶段、申请号201180031310.4、发明名称“用于核酸结合物的具有内涵体溶解剂的优化的体内递送系统”申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及药物领域，具体为肿瘤学领域。

背景技术

癌症的治疗主要由只要有可能的手术、细胞毒剂例如化学疗法以及放射疗法构成。在过去十年中，已出现了用于癌症治疗的分子疗法，例如：靶向细胞膜受体的单克隆抗体、酪氨酸激酶受体的抑制剂或靶向参与细胞增殖、死亡和存活的信号转导的其他激酶。作为细胞生长抑制剂，它们的单独治疗方案往往缺乏足够的临床效益。通过与细胞毒剂组合，往往获得协同性结果，但该结果受到它们累积的副作用的限制。

大多数癌症治疗直接或间接地在所治疗的增殖性肿瘤细胞中造成DNA损伤，这最终导致所述细胞的死亡。然而，肿瘤对这些治疗的几种固有和获得的耐受性至少部分是由于肿瘤细胞的有效DNA修复活性引起的。目前众所周知的是，DNA修复是癌症治疗的重要靶标(Helleday等.Nat.Rev.Cancer,2008,8:193-204)。该领域中最先进的药物开发是PARP抑制剂。

由于DNA修复在所有生命界中都是必不可少的存活过程，因此，它具有多种特化的修复途径，并具有一定的冗余度，使得当一种途径缺陷或被治疗剂例如DNA修复抑制剂阻断时，该过程仍然是健全的。因此，不是靶向参与DNA修复过程的关键基因/蛋白质，而是，不论其生物重要性和临床相关性如何，创新性的分子疗法必须将一种或数种关键途径作为整体性靶标并结合常规疗法来对待，从而达到最有效的癌症治疗。

为了使癌不能防御现有的治疗，设想了整体性靶向DNA损伤感应、信号转导和修复途径。一种策略由下面的方式构成：将模拟双链断裂(DSB)的、名为Dbait的修饰的短DNA分子导入到在那时之前可以有效地修复DSB并因此存活的细胞中。下面这一事实解释了Dbait联合放射疗法(RT)或化学疗法(CT)的抗肿瘤功效：Dbait分子捕获初始DSB感应复合物、干扰下游的修复信号转导，随后瓦解所有DSB修复系统(非同源末端连接和同源重组途径两种)，并最终抑制DSB修复(WO2005/040378；WO2008/034866；Quanz等,2009,Clinical Cancer Research 15:1308；Quanz等,2009,PLoS ONE 4:e6298；Dutreix等,2010,Mut.Res.704:182)。最终，癌细胞不再能够逃脱死亡。还发现，在不与放射疗法(RT)或化学疗法(CT)组合的情况下，Dbait分子单独也是有效的(WO2008/084087)。

然而，一旦鉴定到了有临床用途的活性剂后，经常出现的问题是要找到最佳的方式来递送活性剂，特别是核酸剂。有效的非病毒DNA/RNA递送系统的发展和优化必须解决毒性问题，《组织和全身性屏障》例如降解，带电的血清成分对粒子的调理作用，快速清除和在非靶组织的蓄积；当通过全身性途径施用活性物质时，对其递送而言的“细胞屏障”，例如低摄取跨越细胞质膜，DNA分子在活性细胞室中的释放不充分，以及缺乏细胞核靶向(基因治疗所需要的)。

事实上，大多数这些活性剂必须被细胞摄取并到达细胞质和/或细胞核，才能有效。具体地，当将包括核酸的活性剂以其“游离”或裸露形式施用时，它们常常在被靶细胞摄取之前和之后受到降解。在细胞内，这种降解主要是由于下面这一事实引起的：核酸通过内吞进入细胞，被隔离在细胞的内涵体中，内涵体最终发展成溶酶体，在溶酶体中，化学降解和酶降解是非常有效的。

在现有技术中，已将活性剂与多种载体结合并囊封到脂质体、胶束和纳米粒子中，它们在其中受到保护而免于在血清中降解。现有技术还采用了多种化学方法来将核酸和其他活性剂共价偶联至分子载体，所述分子载体包括聚合物例如葡聚糖或PEG，或旨在降低清除率的分子，包括转铁蛋白的载体，亲脂性分子例如与siRNA连接以增强细胞摄取的胆固醇(Chen等,2010,J.Controlled Release 144:227)。这样的载体可以包括靶向部分例如抗体、多肽、核酸和其他物质，以将活性剂导向所选择的靶细胞中。现有技术还公开了用于药物组合物的改善内吞的分子(US2008/0194540)。