[发明专利]生物膜蛋白质的提取方法和电泳样品的制备方法

权利要求书

1.一种生物膜蛋白质的提取方法，其特征在于：由如下步骤组成：

(1).对生物膜样品进行预处理，得到沉淀物；

(2).将步骤(1)所得沉淀物与裂解液和苯甲基磺酰氟溶液混合，在冰浴条件下超声裂解，得到样品裂解液；

(3).将步骤(2)所得样品裂解液震荡并离心，取上清液，采用TCA-丙酮沉淀法对所述上清液进行处理，得到蛋白质样品；

步骤(1)中的生物膜样品的提取方法为：从蚯蚓生物滤池的滤床内取出带有生物膜的陶粒，用蒸馏水将其上附着的生物膜冲下后，用1mm孔径的筛子筛分以去除杂质颗粒，收集筛下物，以8000rpm的速度于4℃下离心5min以收集生物膜，并将其作为生物膜样品；

步骤(1)中的预处理包括如下步骤：

a.采用浓度为9±1mg/mL的氯化钠溶液洗涤所述生物膜样品，以8000±1000rpm的转速于4±1℃下离心5±1min，收集沉淀；

b.采用磷酸缓冲盐溶液洗涤步骤a所得沉淀，涡旋振荡后以8000±1000rpm的转速于4±1℃下离心5±1min，得到所述沉淀物；

在步骤(2)中，所述裂解液的成分为：50mmol/L pH＝7.4的Tris、150mmol/L的NaCl、1±0.5wt％的Triton X-100、1±0.5wt％的脱氧胆酸钠和0.1±0.05wt％的SDS，其余成分为去离子水；

在步骤(2)中，所述苯甲基磺酰氟溶液的浓度为100±10mmol/L；

在步骤(2)中，超声的强度为250-300W，超声的时间为20±10个周期，每个周期内连续超声20秒并且停止超声10秒；

在步骤(3)中，所述TCA-丙酮沉淀法包括如下步骤：

a.将所述上清液与三氯乙酸以(9±3)︰(1±1)的体积比混合，于4±1℃下静置，然后离心，得到初级沉淀物；

b.将步骤a所得初级沉淀物用三倍于所述初级沉淀物体积的预冷后的丙酮洗涤，于4±1℃下静置并离心，得到次级沉淀物；

c.重复步骤b两至三次，最后一次得到的沉淀物不完全吹干，得到蛋白质样品。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：在步骤(3)中，震荡的条件为：以200-300rpm的速度于4±1℃下进行震荡。

3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：在步骤(3)中，离心的条件为：以13000±1000rpm的转速于4±1℃下离心30±10min。

4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：在步骤a中，静置的时间为30±10min，离心的条件为：以13000±1000rpm的转速于4±1℃下离心10±5min。

5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：在步骤b中，静置的时间为30±10min，离心的条件为：于4±1℃下以13000±1000rpm的转速离心10±5min。