[发明专利]检测单个细胞中的核酸和鉴定异质大细胞群中罕见细胞的方法

权利要求书

1.一种检测单个细胞中两种或多种靶核酸的方法，该方法包括：

提供包含细胞的样品，所述细胞含有或被怀疑含有第一靶核酸和第二靶核酸；

提供含第一标记的第一标记探针和提供含第二标记的第二标记探针，其中第一标记发出的第一信号可与第二标记发出的第二信号相区别；

提供至少第一捕获探针和至少第二捕获探针；

在细胞中，第一捕获探针与细胞中存在的第一靶核酸杂交，第二捕获探针与细胞中存在的第二靶核酸杂交；

第一标记探针被第一捕获探针捕获，第二标记探针被第二捕获探针捕获，从而第一标记探针被第一靶核酸捕获，第二标记探针被第二靶核酸捕获；和

检测第一标记发出的第一信号和第二标记发出的第二信号。

2.一种检测单个细胞中一种或多种靶核酸相对水平的方法，该方法包括：

提供包含细胞的样品，所述细胞含有或被怀疑含有第一靶核酸并且所述细胞含有第二参比核酸；

提供含第一标记的第一标记探针和提供含第二标记的第二标记探针，其中第一标记发出的第一信号可与第二标记发出的第二信号相区别；

在细胞中，第一标记探针被细胞中存在的第一靶核酸捕获，第二标记探针被第二参比核酸捕获；

检测此单个细胞中第一标记发出的第一信号和第二标记发出的第二信号，所述检测第一信号和第二信号包括测定第一信号的强度和第二信号的强度；和

按第二信号的强度标准化第一信号的强度。

3.一种检测特定类型单个细胞的方法，该方法包括：

提供包含多种类型细胞混合物的样品，该混合物含有特定类型的至少一个细胞；

提供含第一标记的第一标记探针和提供含第二标记的第二标记探针，其中第一标记发出的第一信号可与第二标记发出的第二信号相区别；

在细胞中，第一标记探针被细胞中存在的第一靶核酸捕获，第二标记探针被细胞中存在的第二靶核酸捕获；

检测第一标记发出的第一信号和第二标记发出的第二信号；

将细胞中检测到的第一信号和第二信号与细胞中第一和第二靶核酸的存在、缺失或含量相关联；和

根据细胞中第一和第二靶核酸的存在、缺失或含量的检测鉴定该细胞是否为特定类型；

所述特定类型细胞可根据细胞中第一靶核酸的存在、缺失或含量，或第二靶核酸的存在、缺失或含量与混合物中其它类型的细胞相区别。

4.一种组合物，其包含：

固定和经渗透处理的细胞，所述细胞含有或被怀疑含有第一靶核酸和第二靶核酸；

能与第一靶核酸杂交的至少第一捕获探针；

能与第二靶核酸杂交的至少第二捕获探针；

含第一标记的第一标记探针和含第二标记的第二标记探针，其中第一标记发出的第一信号可与第二标记发出的第二信号相区别。

5.一种检测单个细胞中第一靶核酸和第二靶核酸的试剂盒，该试剂盒的一个或多个容器中装有：

至少一种用于固定和渗透处理细胞的试剂；

能与第一靶核酸杂交的至少第一捕获探针；

能与第二靶核酸杂交的至少第二捕获探针；

含第一标记的第一标记探针和含第二标记的第二标记探针，其中第一标记发出的第一信号可与第二标记发出的第二信号相区别。

6.一种通过检测第一靶核酸和第二靶核酸来检测细胞混合物中特定类型单个细胞的试剂盒，该试剂盒的一个或多个容器中装有：

至少一种用于固定和渗透处理细胞的试剂；

含第一标记的第一标记探针和含第二标记的第二标记探针，其中第一标记发出的第一信号可与第二标记发出的第二信号相区别；

通过细胞中第一靶核酸的存在、缺失或含量，或细胞中第二靶核酸的存在、缺失或含量将特定类型细胞与混合物中其它类型的细胞相区别。

7.一种检测单个细胞中两种或多种靶核酸的方法，该方法包括：

提供包含细胞的样品，所述细胞含有或被怀疑含有第一靶核酸和第二靶核酸；

在细胞中，第一标记探针被细胞中存在的第一靶核酸捕获，第二标记探针被细胞中存在的第二靶核酸捕获，其中第一标记发出的第一信号可与第二标记发出的第二信号相区别；第一靶核酸中跨越第一靶核酸至少20个毗连核苷酸区域的每个核苷酸平均至少捕获一个拷贝的第一标记，第二靶核酸中跨越第二靶核酸至少20个毗连核苷酸区域的每个核苷酸平均至少捕获一个拷贝的第二标记；和

检测第一标记发出的第一信号和第二标记发出的第二信号。