[发明专利]荧光定量RT-PCR鉴别检测蓝耳病毒株的方法在审
| 申请号： | 201510061495.3 | 申请日： | 2015-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN104561389A | 公开（公告）日： | 2015-04-29 |
| 发明（设计）人： | 王钦富;张雪梅;胡亚萍;王美辰 | 申请（专利权）人： | 大连大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 大连智高专利事务所(特殊普通合伙) 21235 | 代理人： | 胡景波 |
| 地址： | 116622 辽宁省*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 荧光 定量 rt pcr 鉴别 检测 病毒 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种荧光定量RT-PCR鉴别检测蓝耳病毒株的特异性引物，其特征在于：所述特异性引物上游引物的核苷酸序列为：CTTCCGACACCATCCGAG，下游引物的核苷酸序列为：TTGGCAGGTTGGTCACAG。
2.一种荧光定量RT-PCR鉴别检测蓝耳病毒株的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)提取待测血样中的RNA，并设计特异性引物；
上游引物的核苷酸序列为：CTTCCGACACCATCCGAG，
下游引物的核苷酸序列为：TTGGCAGGTTGGTCACAG；
2)以步骤1)所提取的RNA为模板，加入特异性引物，特异性引物的终浓度为0.2μMol/L；用TARAKA试剂盒反转录，用SYBR Green试剂盒实时荧光定量PCR扩增，扩增条件为：95℃，30s；95℃，15s，55℃，10s，72℃，30s，共循环30次，建立PCR扩增曲线；电泳结束后，取5μl在2％琼脂糖凝胶电泳中检测扩增结果；
3)分析PCR扩增曲线、溶解曲线以及电泳结果，从而对蓝耳病毒株进行鉴别；高致病性毒株的PCR产物大小为820bp；经典毒株的PCR产物大小为907bp；天津疫苗毒株(TJM-F92)的PCR产物大小为460bp。
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