[发明专利]一种用于结核分枝杆菌及其抗原双重染色的试剂盒及其方法

权利要求书

1.一种用于结核分枝杆菌检测的组织切片染色方法，包括如下步骤：

1)将待检测组织切片与抗MTB抗原抗体溶液反应，得到一抗结合切片；

2)将所述一抗结合切片与二抗溶液反应，得到二抗结合切片；

3)用DAB染色液对所述二抗结合切片进行染色，得到DAB染色切片；

4)用石碳酸复红染色液对所述DAB染色切片染色，得到石碳酸复红染色切片；

5)用苏木素染色液对所述石碳酸复红染色切片染色，得到染色切片，实现组织切片染色；

所述待检测组织切片为石蜡包埋的待检测组织切片。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述抗MTB抗原抗体为抗MTB抗原多克隆抗体溶液；

所述MTB抗原的氨基酸序列为序列表中序列1；

所述二抗为羊抗兔IgG抗体；所述羊抗兔IgG抗体具体HRP标记的羊抗兔IgG抗体。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

步骤1)中，所述反应的温度为23-28℃，所述反应的时间为0.5-2h；

步骤2)中，所述反应的温度为23-28℃，所述反应的时间为10-20min；

步骤3)中，所述染色时间为1-10min、染色温度为23-28℃；

步骤4)中，所述染色时间为20-90min、染色温度为23-28℃；

步骤5)中，所述染色时间为0.5-2min、染色温度为23-28℃。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

在步骤1)-2)之间，还包括如下步骤：洗涤所述一抗结合切片；所述洗涤采用的洗涤液具体为浓度为0.01M、pH值为7.4的PBS；

在步骤2)-3)之间，还包括如下步骤：洗涤所述二抗结合切片；所述洗涤采用的洗涤液具体为浓度为0.01M、pH值为7.4的PBS；

在步骤3)-4)之间，还包括如下步骤：洗涤所述DAB染色切片；所述洗涤采用的洗涤液具体浓度为0.01M、pH值为7.4的PBS或水；

在步骤4)-5)之间，还包括如下步骤：先用分化液脱色所述石碳酸复红染色切片得到脱色后石碳酸复红染色切片，再洗涤所述脱色后石碳酸复红染色切片；所述洗涤采用的洗涤液具体浓度为0.01M、pH值为7.4的PBS或水；

在步骤5)中，在所述染色得到染色切片后还包括如下步骤：先分化液脱色所述染色切片，得到脱色后染色切片，再洗涤所述脱色后染色切片；所述洗涤采用的洗涤液具体浓度为0.01M、pH值为7.4的PBS或水。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：

所述脱色时间均为30秒-60秒。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：

在所述方法的步骤1)前，还包括如下步骤：

A、将所述石蜡包埋的待检测组织切片进行脱蜡水化，得到脱蜡水化后切片；

B、将所述脱蜡水化后切片在浓度为0.01M、pH值为6.0的柠檬酸缓冲液中高压修复，得到修复后切片；

所述高压的压力为80-100千帕；

所述修复时间为90s，所述修复的温度为100℃。

7.一种用于结核分枝杆菌检测的组织切片染色的试剂盒，包括DAB染色液、石碳酸复红染色液和苏木素染色液；

所述试剂盒还包括记载在可读载体上的染色方法，所述染色方法为权利要求1-6中任一所述的方法。

8.权利要求7所述的试剂盒在如下1)或2)至少一种中的应用：

1)制备检测或辅助检测或诊断或辅助诊断结核分枝杆菌产品中的应用；

2)制备鉴定或辅助鉴定待测样本是否含有结核分枝杆菌产品中的应用。