[发明专利]3-氯-1，2-丙二醇的高效液相色谱-荧光检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种3-氯-1，2-丙二醇的高效液相色谱-荧光检测方法，属于分析化学领域。

背景技术

3-氯-1,2-丙二醇又称3-氯丙二醇或氯甘油，其英文名为3-monochloro-1,2-propanediol，简写3-MCPD，其化学结构式为：CH₂Cl-CHOH-CH₂OH。3-MCPD是一种一氯代二元醇，为无色有甜味的液体，凝固点-40℃，沸点213℃(分解)，相对密度1.3218(20℃)，折射率1.4809(20℃)，溶于水、乙醇、乙醚和丙酮，微溶于甲苯，不溶于苯、石油醚和四氯化碳；不稳定，放置后渐变为稻黄色，易吸潮。

近年来的毒性研究表明，3-MCPD对人体健康具有较强的危害，已经成为一种国际公认的食品化学污染物，其毒性主要表现为：①急、慢性毒性：3-MCPD的大鼠经口半数致死量LD₅₀为150mg/kg.bw。雄性大鼠连续经口染毒3-MCPD 1mg/kg/day以上剂量时，可以出现精子活动减弱和生殖力降低，剂量大于或等于10-20mg/kg/day，可见大鼠的精子有显著的形态学改变和附睾损伤；②遗传毒性：目前大多数研究机构和学者认为3-MCPD属于非遗传毒性致癌物，暂定每日最大耐受量(TDI)为2μg/kg.bw；③致癌性：英国致癌委员会(Committee on carcinoginicity)认为，3-MCPD在动物实验中会引起致癌；而英国致变异委员会(Committee on Mutagenicity)认为，3-MCPD在体内实验中，是一个非基因毒性的致癌物质；④神经毒性：小鼠和大鼠对3-MCPD的神经毒性作用敏感性相同，尤其是对脑干的对称性损伤。当3-MCPD染毒剂量大于25mg/kg.bw/day时，实验动物中枢神经系统损伤呈现显著的剂量效应关系。

食品中氯丙醇的污染首先是在以酸水解植物蛋白(HVP)为原料的调味品(如鸡精和酱油等)中发现的，以后又陆续在麦芽提取物、变性淀粉、肉类提取物、饼干、面包、香肠、谷物类等中检出。2006年捷克的Zelinková Z.等人首先发现在食用油中存在氯丙醇脂肪酸酯。2007年Seefelder W.等人研究发现在精炼油脂中氯丙醇脂肪酸酯的含量范围在0.2～20mg/kg之间，其中精炼植物油按照菜籽油、大豆油、葵花籽油、红花油、核桃油和棕榈油的数序递增。

环境水体中，由于工业废水的排放会导致一定程度的3-MCPD污染，如酸水解植物蛋白生产废水的排放、纸浆生产过程中湿强剂-聚酰胺聚胺表氯醇树脂的使用都是产生3-MCPD污染的重要来源，如不经处理会导致附近水体的污染；另外，在水处理过程中多胺絮凝剂的使用也会产生一定程度的3-MCPD污染。

正由于3-MCPD对人体危害严重，许多国家都制定了限量标准来控制食品及饮用水中的该项污染物，如欧盟在2001年制订了限量标准，规定不得超过每日20μg/kg.bw的摄入量；我国也建立了检测酱油中3-MCPD的国家标准。英国饮用水检查机构(Drinking Water Inspectorate)规定饮用水中3-MCPD的最大含量不得超过0.1mg/L。由于食品及饮用水中3-MCPD安全限均达到ppb级，故必须采用灵敏度高的检测方法才能达到监控要求，目前常用的手段主要为气相色谱(GC)、气相色谱-质谱联用(GC-MS)。由于3-MCPD的极性与沸点较高，测定过程中均需要将3-MCPD从基质中富集、萃取出来，然后进行衍生化。常用的萃取方法有液-液萃取(LLE)、基质固相分散萃取(MSPD)、固相微萃取(SPME)等；而衍生化方法则主要有酮类衍生、硼酸类衍生(苯基硼酸、丁基硼酸)、N,O-双三甲基-三氟乙酰胺(BSTFA)、酸酐类衍生(HFBA)、七氟丁酰咪唑(HFBI)等。然而，由于3-MCPD水溶性好，沸点较高，故基于气相色谱测定3-MCPD的分析方法具有前处理过程复杂、繁琐，衍生化条件苛刻、仪器使用维护成本高等缺点。鉴于此，发展基于高效液相色谱的成本低、简便易行的高灵敏检测方法具有十分重要的意义，专利CN102565270首次报道了一种结合高碘酸氧化裂解、碱基或核苷(核苷酸)衍生化的反相液相色谱-荧光检测法，该方法测试成本低、操作简单、灵敏度高，可适用于油脂、酱油等食品中3-MCPD的测定，不过，由于所使用的荧光衍生化试剂亲水性太强，目标产物在反相液相色谱中保留较弱，测定食品类复杂样品时可能易受到基质效应的干扰，影响测定的准确度与重现性，因此，开发新型荧光性能好、疏水性更强的荧光衍生化试剂将更加有利于发挥该方法的长处与优势。