[发明专利]用于编码多个PCR反应进行测定识别的方法

说明书

本发明提供了使用荧光染料鉴定用于执行PCR测定的试剂和溶液的方法和组合物。

技术领域

本发明涉及通过聚合酶链式反应(PCR)测定进行核酸扩增的领域。具体地，本发明涉及荧光染料用于鉴定试剂的用途，所述试剂用于执行PCR测定。

背景技术

PCR是一种用于扩增DNA或RNA的有力技术，所述DNA或RNA可以用于多种目的。PCR的众多应用包括它的用于诊断病毒或细菌基因以及鉴定基因突变的应用。目前，PCR测定可以以实时同质形式执行，例如TaqMan®测定，并使用可以同时试验多达四种核酸序列的仪器。在一种典型的TaqMan®测定中，通过使用淬灭的荧光探针来检测靶核酸（所述荧光探针在PCR扩增过程中切割，从而导致荧光信号的增加）。但是，为了控制在PCR过程中可能发生的变异性以及控制给定PCR测定的灵敏度的优化，经常使用执行PCR所需的不同的酶、金属辅因子和组分的浓度。在实践中，在按照测定的基础上将这些组分中的许多预混合成单一溶液，其被称作主混合物。因为此，使用相同荧光团、但是使用不同组分的测定可能并行地执行(例如在多孔板上的邻近孔中)且未经预先鉴定，所述反应将是不能辨别的，这意味着，阳性荧光信号可能误解为错误靶核酸的阳性结果。

目前，不存在克服以下困难的方法：确保在给定靶核酸的PCR测定中使用正确的主混合物。该问题在临床实验室场合中是特别关键的，以确保没有发生用户错误。尽管这些错误的发生率较低，它们的发生可能被导致非常重要的要减弱的假阳性或假阴性结果的产生。

发明概述

本发明解决了以下需要：在PCR测定所用的试剂和主混合物溶液的适当制备中建立确定性，并在从这样的PCR测定产生的数据中产生较高可靠性。在一个方面，本发明提供了一种用于制备多种反应混合物的方法，所述多种反应混合物用于执行多种靶核酸的聚合酶链式反应(PCR)扩增，所述方法包括提供第一主混合物溶液，所述溶液包含至少一种执行第一靶核酸的PCR扩增所需的物质，且进一步包含以所述第一主混合物溶液独有的预定浓度比存在的第一荧光染料和第二荧光染料；提供第二主混合物溶液，所述溶液包含至少一种执行第二靶核酸的PCR扩增所需的物质，且进一步包含以预定浓度比存在的所述第一荧光染料和所述第二荧光染料，所述预定浓度比不同于所述第一主混合物溶液中的预定浓度比且是所述第二主混合物溶液所独有的；将所述第一主混合物溶液加入第一反应混合物以执行所述第一靶核酸的PCR扩增；和将所述第二主混合物溶液加入第二反应混合物以执行所述第二靶核酸的PCR扩增。

在另一个方面，本发明提供了一种用于编码靶核酸的PCR扩增所用的主混合物溶液的身份的方法，所述方法包括在主混合物溶液中将以预定浓度比存在的第一荧光染料和第二荧光染料混合在一起，所述预定浓度比产生所述第一荧光染料相对于所述第二荧光染料的荧光比，所述荧光比可与从其它主混合物溶液产生的荧光比区分开；检测来自所述第一荧光染料和来自所述第二荧光染料的荧光；和确定所述荧光比，由此鉴定所述主混合物溶液。

在还另一个方面，本发明提供了一种用于执行多种靶核酸的PCR扩增的试剂盒，所述试剂盒包含多种主混合物溶液，其中来自所述多种主混合物溶液的每一种主混合物溶液包含至少一种执行特定靶核酸的PCR扩增所需的物质，且进一步包含第一荧光染料和第二荧光染料；且其中对于所述每一种主混合物溶液，所述第一荧光染料和所述第二荧光染料以不同的浓度比存在并产生与来自所述多种主混合物溶液的每种其它主混合物溶液可辨别的荧光比。

附图说明

图1描绘了在实施例1中进行的实验的图，该图显示了就JA270/Cy5.5而言浓度比和荧光比之间的关联。左图描绘了右图在0-1.66之间的浓度比处的放大图。

发明详述

定义