[发明专利]白介素-2融合蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及白介素-2融合蛋白。更具体地说，本发明部分地提供了包含结合至 Bcl-2家族成员蛋白部分的白介素-2蛋白部分的融合蛋白。

背景技术

白介素-2(IL-2)是主要由激活CD4⁺T细胞产生的多效性细胞因子，其在产生正常 免疫应答中发挥关键的作用。IL-2促进激活T淋巴细胞的增殖和扩大培养、增强B细胞生长、 并且激活单核细胞和天然杀手细胞。

IL-2是协同表达的IL-2受体α(IL-2Rα或者CD25；也称为“Tac”抗原)、IL-2受体β (IL-2Rβ或者CD122)以及白介素-2受体γ(IL-2Rγ或者CD132；共有γ链)的配体。

IL-2Rα以约10^-8M的K_d与IL-2结合，并且也称为“低亲和力”的IL-2受体；IL-2与仅 表达IL-2Rα的细胞的结合没有导致任何可检测的生物学反应。

大多数细胞例如静息T细胞对IL-2是不敏感的，因为它们仅表达IL-2Rβ和IL-2R γ。抗原受体介导T细胞激活后，IL-2Rα迅速表达。一旦IL-2Rα结合IL-2，其然后依次与IL- 2Rβ和IL-2Rγ配合，导致信号转导和IL-2介导的生长刺激。

重组人IL-2(阿地白介素)被允许当作免疫疗法来治疗转移性黑色素瘤和转移性肾癌。被用于治疗癌症已超过15年，并且已经表明在患有转移性黑色素瘤或者肾癌的患者中具有约15％的完全或者部分反应比例。但是，Proleukin造成引起肺部水肿和肝损伤的副作用。

(地尼白介素(denileukindiftitox))是一种由作为靶向配体的IL-2和作为细胞杀灭载荷的修饰细菌毒素组成的融合蛋白，在美国被允许用于治疗皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)。尽管Ontak被广泛认为是治疗CTCL的有效药物，但是其具有重大的安全问题，导致在美国的使用受到限制并且在美国之外没有得到许可。由于其在1999允许用于CTCL，在类风湿性关节炎、银屑病、肺癌和其他适应症中的试验已经表明Ontak具有鼓舞人心的有效迹象，但是因为严重的毒副作用的缘故而已经被放弃。因此，使用IL-2作为抗肿瘤剂已经受到伴随用于肿瘤反应所需剂量的严重毒性的限制。

环状排列(circularlypermuted)的分子是线性分子(例如配体)的末端已经直接 或者经由接头连接在一起从而产生环状分子的那些分子，此后所述环状分子在另一个位置 打开从而产生新的带有不同于原先分子的末端的末端的线性分子。IL-2的环状排列变体已 经在例如于2000年1月4日授权给Pastan等的美国专利No.6,011,002中有描述。

程序化细胞死亡或者“凋亡”是一种在动物细胞发育中常见的现象，并且受到主动 调节和被动调节这两者调节。除了其参与淋巴样系统发育和整个细胞群稳态之外，凋亡还 在由凋亡途径的异常调节引起的各种疾病和损伤中发挥重要的作用。相反，凋亡的异常抑 制能够导致细胞的过度增殖，从而导致癌症和其他的过度增殖性紊乱。

凋亡受到很多蛋白的调节，这些蛋白包括Bcl-2家族的成员。Bcl-2是被鉴定为调 节凋亡的第一批蛋白之一(Cleary等，Cell47：19-28，1986；Tsujimoto和Croce， Proc.Natl.Acad.Sci.USA83：5214-5218，1986)。由于它的发现，已经有若干个Bcl-2相关 蛋白(“Bcl-2家族蛋白”或者“Bcl-2家族成员”)被鉴定为凋亡的调节因子(White，Genes Dev.10：1-15，1996；Yang等，细胞80：285-291，1995)。

已经探索了用于治疗癌症等的若干种治疗性试剂，但是这些治疗性试剂表现出限 制了它们在临床中的应用的多种局限性。例如，很多化学治疗性试剂通过诱导正在增殖的 赘生性细胞中的凋亡来发挥作用，但是它们的治疗价值受到它们对正常细胞具有毒性的程 度的限制。使用标准凋亡抑制性分子例如肽类半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspases)抑制剂 (例如DEVD类)进行的治疗已经证明由于这些抑制剂具有低的膜渗透性而无法满意地用于 临床工作。