[发明专利]一种树鼩精子活力评价的荧光染色法

权利要求书

1.一种树鼩精子活力评价的荧光染色法，其特征在于，通过以下步骤实现：

（1）TALP-HEPES洗精液的配制

按每100mL溶液中含氯化钠742 mg、氯化钾23.6 mg、二水氯化钙29.4 mg、六水氯化镁10.2 mg、葡萄糖90.1 mg、磷酸二氢钠4.8 mg、碳酸氢钠16.8 mg、丙酮酸钠1.1 mg、酚红1 mg、HEPES钠130.2 mg、HEPES酸119.2 mg、乳酸钠60%水溶液185 μL、庆大霉素5 mg和牛血清白蛋白300 mg的配比，用Milli-Q超纯水混合均匀，用NaOH 或HCl调节pH至7.4，制成TALP-HEPES洗精液；

（2）精液采集

通过外科手术从树鼩睾丸中分离出附睾尾和输精管,用TALP-HEPES洗精液冲洗附睾并去除血液和脂肪组织, 随后将附睾尾置于含1mL 37 ℃ TALP-HEPES洗精液的小离心管中, 用精细手术剪剪碎附睾尾, 继续于37 ℃孵育10 min 让精子游出；

（3）精液洗涤

用精细镊子夹出附睾组织，小心将精子吸至另一4mL离心管中，加入2mL 37 ℃ TALP-HEPES洗精液于250g, 离心5 min，洗2次, 弃上清, 沉淀用37 ℃ TALP-HEPES洗精液重悬；

（4）染色

取1mL洗涤后的精液，分别加入2μL H342和8μL PI，37℃温浴15min；

（5）显微镜检测

取8μl染色后的精液于载玻片上，盖上盖玻片，在荧光显微镜下检测并计数。

2.根据权利要求1所述的一种树鼩精子活力评价的荧光染色法，其特征在于，所述步骤（4）中H342代表Hoechst 33342。

3.根据权利要求1所述的一种树鼩精子活力评价的荧光染色法，其特征在于，所述步骤（4）中H342和PI为浓度1mg/mL的贮存液，事先用Milli-Q超纯水配制、分装并保存于-20℃冰箱。