[发明专利]一株敲除丙酮酸甲酸裂解酶基因的工程菌及其应用

权利要求书

1.一种敲除甲酸代谢途径基因的工程菌的构建方法，其特征在于，是将克雷伯氏菌属(Klebsiella)的细菌的丙酮酸甲酸裂解酶flpB基因敲除后获得的工程菌。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的克雷伯氏菌属的细菌为肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的将克雷伯氏菌的丙酮酸甲酸裂解酶flpB基因敲除，具体通过以下方法敲除：

a、PCR引物扩增克雷伯氏菌的丙酮酸甲酸裂解酶flpB基因的部分序列，将其与自杀载体相连，然后再导入杂交供体菌株中；

b、将步骤a获得的携带有丙酮酸甲酸裂解酶flpB基因的部分序列与自杀载体的供体菌与克雷伯氏菌进行双亲本杂交，利用同源重组、基因插入失活，经筛选后获得丙酮酸甲酸裂解酶flpB基因被失活的敲除甲酸代谢途径基因的克雷伯氏菌。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，当所述的克雷伯氏菌属的细菌为肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)时，所述的步骤a的PCR扩增克雷伯氏菌的丙酮酸甲酸裂解酶flpB基因的部分序列是以肺炎克雷伯氏菌的基因组DNA为模板，以上游引物pflB-F：taggtacctgaaagacaaattcgcccag与下游引物pflB-R：gagagctccatgcgatccattacttcgt组成的引物对进行PCR扩增后的序列。

5.根据权利要求3或4所述的构建方法，其特征在于，所述的自杀载体为自杀载体pGPCm，所述的杂交供体菌为大肠杆菌SM10(λpir)。

6.一种按照权利要求1、2、3或4所述的构建方法构建得到的敲除甲酸代谢途径基因的工程菌。

7.权利要求6所述的敲除甲酸代谢途径基因的工程菌在生产1，3-丙二醇中的应用。

8.一种按照权利要求5所述的构建方法构建得到的敲除甲酸代谢途径基因的工程菌。

9.权利要求8所述的敲除甲酸代谢途径基因的工程菌在生产1，3-丙二醇中的应用。