[发明专利]一种磁珠法提取细菌中核酸的试剂盒及提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及核酸提取的生物技术领域，特别是一种基于磁珠法提取细菌中核酸的试剂盒。本发明还涉及使用磁珠法提取细菌中核酸的方法。

背景技术

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术自80年代面世以来，越来越多的应用于分子生物学领域，核酸的分子生物学技术是进行病原微生物检测，构建基因库，物种起源、多样性评估及其亲缘关系、系统进化等常用研究手段之一。但核酸的提取是PCR技术应用的前提，且能否提取出高质量的核酸分子是许多核酸分子生物学试验中的关键，提取方法的灵敏度、特异性也将直接关系到后续试验的成败。碱裂解提取法到柱纯化等提取技术，目前广泛地用于细菌的DNA和RNA的提取，但这些方法还是存在诸多缺点，如耗时长、效率低，并且由于采用苯酚等毒性有机溶剂，操作有一定的风险性。

相比上述核酸提取技术，磁性分离法是一种简单有效的核酸提纯方法。该方法使用的磁珠表面连接了可特异地与DNA发生作用的功能基团，具有可逆吸附DNA的特性。磁珠法提纯核酸最大的优点是自动化，以及提供的试剂可用于磁性工具，该种方法不需要任何有机溶剂，也不需要反复离心，真空过滤或柱分离等步骤，仅仅是以核酸结合磁粉为基础，大大减少了试验对工作人员的危害，以及降低了对试验设备的特殊要求。磁珠法所用试剂种类与浓度等参数的选择决定了提取核酸的质量与效率，也与成本密切相关，因此不断探索更为便捷和高效的提取工具和提取方法，对核酸提取相关的基因工程的各项研究具有重大的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的细菌核酸快速提取的试剂盒及提取核酸的方法，该试剂盒具有操作简单快速、使用安全、提取效率高、制造成本低的特点。应用该试剂盒及方法，可以对用于PCR技术检测的生物学中的多种细菌中的核酸实现快速提取。

本发明的技术方案为：

一种磁珠法提取细菌中核酸的试剂盒，包含组分为：细菌裂解液、磁珠结合液、磁珠洗涤液和核酸洗脱液。所述细菌裂解液含有十二烷基硫酸钠、乙二胺四乙酸、三羟甲基氨基甲烷和氯化钠；所述磁珠结合液含有聚乙二醇-8000和氯化钠；所述磁珠洗涤液含有乙醇；所述核酸洗脱液含有羟甲基氨基甲烷和乙二胺四乙酸；

优选的，所述磁珠结合液中，聚乙二醇-8000的浓度为20-30mmol/L，氯化钠的浓度为3mol/L；

优选的，所述磁珠洗涤液中，乙醇的体积比浓度为70％-90％；

优选的，所述核酸洗脱液中，三羟甲基氨基甲烷的浓度为为5-15mmol/L，所述乙二胺四乙酸的浓度为1.30-1.50mmol/L；

进一步优选的，所述三羟甲基氨基甲烷的浓度为10mmol/L，所述乙二胺四乙酸的浓度为1.35mmol/L；

优选的，在所述细菌裂解液中，十二烷基硫酸钠的浓度为40-60mmol/L，所述乙二胺四乙酸的浓度为20-40mmol/L，所述三羟甲基氨基甲烷的浓度为90-115mmol/L，所述氯化钠的浓度为480-520mmol/L，余量为无菌水；所述细菌裂解液通过加入氢氧化钠调节pH值至7.5-8.5。

一种磁珠法提取细菌中核酸的提取方法，包括以下步骤：

步骤1：将细菌及培养液混合物离心分离，去上清除去细胞培养液，留下细菌菌体；离心分离的转速为13000r/min，离心分离的时间为2分钟；

步骤2：向菌体中加入细菌裂解液，混匀；

步骤3：加入磁珠及磁珠结合液，磁铁吸附去上清；

步骤4：加入磁珠洗涤液，使用磁铁吸附磁珠，去上清；

步骤5：加入核酸洗脱液，使用磁铁吸附磁珠，转移洗脱液，得到细菌的核酸溶液。

优选的，上述步骤2中加入的细菌裂解液的体积与细菌培养液的体积比为1:1-1:5，步骤3中加入的磁珠与磁珠结合液与细菌裂解液的体积比为1:10-1:20，步骤4中磁珠洗涤液与细菌裂解液的体积比为1:0.1-1:0.5，步骤5中核酸洗脱液与细菌裂解液的体积比为1：10-1:20。

一种磁珠法提取细菌中核酸的提取方法，包括以下步骤：

步骤1：将细菌及培养液混合物离心分离，去上清除去细胞培养液，留下细菌菌体；离心分离的转速为13000r/min，离心分离的时间为2分钟；

步骤2：向菌体中加入细菌裂解液，混匀后，转移至96孔反应板的1排和7排；在2排和8排加入磁珠及磁珠结合液；在3排、4排、5排和9排、10排、11排加入磁珠洗涤液；在6排和12排加入核酸洗脱液；