[发明专利]一种磁珠法提取细菌中核酸的试剂盒及提取方法

权利要求书

1.一种磁珠法提取细菌中核酸的试剂盒，所述试剂盒中的试剂含有以下组分：细菌裂解液、磁珠结合液、磁珠洗涤液和核酸洗脱液，其特征在于：

所述细菌裂解液含有以下组分：十二烷基硫酸钠、乙二胺四乙酸、三羟甲基氨基甲烷和氯化钠；

所述磁珠结合液含有以下组分：聚乙二醇-8000和氯化钠；

所述磁珠洗涤液含有以下组分：乙醇；

所述核酸洗脱液含有以下组分：三羟甲基氨基甲烷和乙二胺四乙酸。

2.根据权利要求1所述的磁珠法提取细菌中核酸的试剂盒，其特征在于：在所述磁珠结合液中，聚乙二醇-8000的浓度为20-30mmol/L，氯化钠的浓度为3mol/L。

3.根据权利要求1所述的磁珠法提取细菌中核酸的试剂盒，其特征在于：在所述磁珠洗涤液中，乙醇的体积比浓度为70％-90％。

4.根据权利要求1所述的磁珠法提取细菌中核酸的试剂盒，其特征在于：在所述核酸洗脱液中，三羟甲基氨基甲烷的浓度为5-15mmol/L，乙二胺四乙酸的浓度为1.30-1.50mmol/L。

5.根据权利要求4所述的磁珠法提取细菌中核酸的试剂盒，其特征在于：所述三羟甲基氨基甲烷的浓度为10mmol/L，所述乙二胺四乙酸的浓度为1.35mmol/L。

6.根据权利要求1至5任一项所述的磁珠法提取细菌中核酸的试剂盒，其特征在于：所述十二烷基硫酸钠的浓度为40-60mmol/L，所述乙二胺四乙酸的浓度为20-40mmol/L，所述三羟甲基氨基甲烷的浓度为90-115mmol/L，所述氯化钠的浓度为480-520mmol/L，余量为无菌水；所述细菌裂解液通过加入氢氧化钠调节pH值至7.5-8.5。

7.一种磁珠法提取细菌中核酸的提取方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤1：将细菌及培养液混合物离心分离，去上清除去细胞培养液，留下细菌菌体；离心分离的转速为13000r/min，离心分离的时间为2min；

步骤2：向菌体中加入细菌裂解液，混匀；

步骤3：加入磁珠及磁珠结合液，磁珠与核酸结合后，磁铁吸附磁珠去上清；

步骤4：加入磁珠洗涤液，使用磁铁吸附磁珠，去上清；

步骤5：加入核酸洗脱液，使用磁铁吸附磁珠，转移洗脱液，得到细菌的核酸溶液。

8.根据权利要求7所述的磁珠法提取细菌中核酸的提取方法，其特征在于：步骤2中加入的细菌裂解液的体积与细菌培养液的体积比为1:1-1:5，步骤3中加入的磁珠与磁珠结合液与细菌裂解液的体积比为1:10-1:20，步骤4中磁珠洗涤液与细菌裂解液的体积比为1:0.1-1:0.5，步骤5中核酸洗脱液与细菌裂解液的体积比为1：10-1:20。

9.一种磁珠法提取细菌中核酸的提取方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤1：将细菌及培养液混合物离心分离，去上清除去细胞培养液，留下细菌菌体；离心分离的转速为13000r/min，离心分离的时间为2min；

步骤2：向菌体中加入细菌裂解液，混匀后，转移至96孔反应板的1排和7排；在2排和8排加入磁珠及磁珠结合液；在3排、4排、5排和9排、10排、11排加入磁珠洗涤液；在6排和12排加入核酸洗脱液；

步骤3：将注入试剂的96孔反应板放入核酸提取仪，自动运行结束后得到细菌核酸洗脱液。

10.根据权利要求9所述的磁珠法提取细菌中核酸的提取方法，其特征在于：步骤2中注入96孔反应板的细菌裂解液的体积为200-300μL，与200-400μL无水乙醇混匀；注入的磁珠及磁珠结合液的体积为50-150μL，与300-400μL双蒸水混匀；注入的磁珠洗涤液的体积为500-700μL；注入的核酸洗脱液的体积为50-300μL。