[发明专利]L-精氨酸-α-酮戊二酸的高效液相色谱检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及柱色谱法技术领域。

背景技术

L-精氨酸-α-酮戊二酸是目前国际市场上销售量日益增大的一种氨基酸盐类保健品，主要用于提高人体蛋白质和增强人的体格等。有1∶1和2∶1（精氨酸和酮戊二酸的摩尔比）两种规格，L-精氨酸-α-酮戊二酸（2∶1）及其制剂是法国瑞法兰药厂研制的护肝药物，针对肝脏功能失调能直接且快速提供营养，给肝细胞提供能量，迅速维护肝脏正常功能及健康。

现有技术中景宏武等公开了采用分光光度法测定α-酮戊二酸（α-酮戊二酸和丙酮酸的分光光度法同时测定，同济大学学报，1986，14（4）：531-536），但分光光度法精度差，准确性不高，而且仅能测定α-酮戊二酸的含量。

毛影等公开了采用高效液相色谱法测定酮戊二酸的含量（HPLC法测定酮戊二酸的含量，中国药事，2008，22（10）：598-599），其采用Agilent ODS C₁₈柱，以0.5%（NH₄）₂HPO₄-H₃PO₄缓冲液为流动相，流速为1.0ml/min，紫外检测波长为233nm，但该方法也仅能用于测定酮戊二酸的含量，无法对L-精氨酸-α-酮戊二酸进行含量检测。

2010版中国药典注射用头孢他啶品种项下含量测定中精氨酸含量测定，用二羟基丙基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-pH2.0磷酸盐缓冲液（称取磷酸二氢铵1.15g，加水800ml使溶解后，用磷酸调节pH值至2.0，再用水稀释至1000ml，混匀）（750∶250）为流动相，检测波长为206nm，但该方法仅能测定L-精氨酸的含量。

申请号201010192571.1的专利一种酮戊二酸精氨酸盐的HPLC检测方法（北京嘉事联博医药科技有限公司）中色谱条件为：流动相乙腈-磷酸盐缓冲液=60∶40，其中的磷酸盐缓冲液为0.02mol/L磷酸二氢钠溶液，并用0.02mol/L的磷酸氢二钠溶液调节pH值至5.2；流速1.0ml/L，检测波长205nm，色谱柱为Agilent NH₂，5μm，4.6×250mm的氨基柱，但氨基柱平衡时间长，大约需1-2小时，甚至更长，基线不易稳定。而且氨基柱的键合官能团氨丙基要比C₁₈、C₈柱的键合官能团C₁₈、C₈容易水解，所以使用寿命与C₁₈、C₈柱相比稍逊。当使用氨基柱进行酸性物质的检测时，酸性物质的存在意味着质子的存在，会使略带负电荷的氨基官能团质子化，从而导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降，影响含量测定准确性。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种L-精氨酸-α-酮戊二酸的高效液相色谱检测方法，采用C₁₈色谱柱，进行高效液相色谱分析，可以通过一次高效液相色谱检测，同时准确测定出L-精氨酸-α-酮戊二酸或其制剂中L-精氨酸和α-酮戊二酸的含量，两种成分能达到良好的分离，可方便地用于L-精氨酸-α-酮戊二酸含量的检测，确保其质量可控，而且C₁₈色谱柱平衡时间短，约需30-40分钟便可，提高了工作效率。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：一种L-精氨酸-α-酮戊二酸的高效液相色谱检测方法，其色谱条件为：

色谱柱：C₁₈色谱柱；

流动相：0.02mol/L～0.08mol/L磷酸盐缓冲液，pH3.0-4.0；

流动相流速：0.5-1.3ml/min；

检测波长：200-210nm；

色谱柱柱温：15℃～30℃；

进行高效液相色谱分析，测定L-精氨酸-α-酮戊二酸或其制剂中L-精氨酸和α-酮戊二酸的含量。

优选的，L-精氨酸-α-酮戊二酸的高效液相色谱检测方法，包括以下步骤：

（1）配制流动相，调节pH值，过滤、脱气；

（2）调节高效液相色谱仪条件，开机平衡色谱柱；

（3）对照品和供试品溶液的配置：称取L-精氨酸和α-酮戊二酸对照品及L-精氨酸-α-酮戊二酸供试品，分别用流动相溶解定容，即得；

（4）将对照品溶液、供试品溶液过滤后注入高效液相色谱仪，记录色谱图及峰面积，采用外标法计算含量。