[发明专利]一种检测人线粒体基因组特异性的引物组

说明书

技术领域

本发明属基因组学领域，涉及一种新型人类线粒体全基因组序列的扩增引物。

背景技术

线粒体是真核生物细胞内非常重要的细胞器，是真核生物进行氧化代谢的主要部位，是糖类等物质在细胞中最终氧化释放能量的场所。线粒体自身具有一套独立的基因组，它只在卵母细胞中进行分裂，因此具有母系遗传的特点，即只通过女性向下一代进行传递。线粒体DNA基因突变的传递有一定数量上的特点。

每个细胞中含有大量线粒体，如果细胞内所有的线粒体DNA上的某一位点均为同一类型的碱基，即全部都是正常基因或同为突变基因，则该细胞为纯质的；如果细胞内所有的线粒体DNA上的某一位点同时存在正常基因和突变基因，则该细胞为异质的。当异质率到达一定的水平后，就有可能对细胞的正常功能产生影响。

研究显示，线粒体基因的突变会导致：KSS综合症，Leigh氏病或称亚急性坏死性脑肌病，ELAS综合症，MERRF综合症，Leber氏遗传性视神经萎缩症，Alper综合症，慢性进行性外眼肌麻痹，线粒体神经消化道脑肌病，Pearson综合症等。

长片段测序，对于样品以及Taq酶要求较高，也不能保证较高的准确性。本法方法设计16对引物，而后PCR产物直接测序，最后进行拼接的方法，能有效地提高数据的准确率，同时还能检测出线粒体基因的异质率。

发明内容  

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种检测人线粒体基因组特异性的引物组，利用提供的引物，扩增出人类线粒体基因组的片段后进行测序拼接，从而确定某个人类个体的线粒体全基因组序列，在对其进行突变位点分析后，为线粒体相关疾病的治疗和预防提供相关依据。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种检测人线粒体基因组特异性的引物组，该引物组包括：

第一引物对：如SEQ ID NO.1所示的的正向引物；如SEQ ID NO.2所示的的反向引物；

第二引物对：如SEQ ID NO.3所示的的正向引物；如SEQ ID NO.4所示的的反向引物；

第三引物对：如SEQ ID NO.5所示的的正向引物；如SEQ ID NO.6所示的的反向引物；

第四引物对：如SEQ ID NO.7所示的的正向引物；如SEQ ID NO.8所示的的反向引物；

第五引物对：如SEQ ID NO.9所示的的正向引物；如SEQ ID NO.10所示的的反向引物；

第六引物对：如SEQ ID NO.11所示的的正向引物；如SEQ ID NO.12所示的的反向引物；

第七引物对：如SEQ ID NO.13所示的的正向引物；如SEQ ID NO.14所示的的反向引物；

第八引物对：如SEQ ID NO.15所示的的正向引物；如SEQ ID NO.16所示的的反向引物；

第九引物对：如SEQ ID NO.17所示的的正向引物；如SEQ ID NO.18所示的的反向引物；

第十引物对：如SEQ ID NO.19所示的的正向引物；如SEQ ID NO.20所示的的反向引物；

第十一引物对：如SEQ ID NO.21所示的的正向引物；如SEQ ID NO.22所示的的反向引物；

第十二引物对：如SEQ ID NO.23所示的的正向引物；如SEQ ID NO.24所示的的反向引物；

第十三引物对：如SEQ ID NO.25所示的的正向引物；如SEQ ID NO.26所示的的反向引物；

第十四引物对：如SEQ ID NO.27所示的的正向引物；如SEQ ID NO.28所示的的反向引物；

第十五引物对：如SEQ ID NO.29所示的的正向引物；如SEQ ID NO.30所示的的反向引物；

第十六引物对：如SEQ ID NO.31所示的的正向引物；如SEQ ID NO.32所示的的反向引物。

本发明的有益效果是：本发明设计16对引物，而后PCR产物直接测序，最后进行拼接的方法，相比于现有技术中长片段测序，本发明所设计引物的扩增产物覆盖了整个线粒体的全基因组序列，每对引物的扩增产物长度在1200～1300bp，且相邻两对引物获得的序列重叠100～300bp。因此可以一次性地准确地获得线粒体基因组的信息，检测到线粒体基因组上的所有突变，辅助进行线粒体相关疾病的诊断。

附图说明   

图1是实施例1中提取的人类基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳图。