[发明专利]试剂盒及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体的，涉及试剂盒及其用途，更具体的，本发明涉及一种试 剂盒、试剂盒的用途、一种构建目标区域测序文库的方法、一种测序方法、一种检测目标区域 变异的方法和装置、以及一种对妇科生殖道肿瘤进行早期筛查的方法和装置。

背景技术

肿瘤是严重威胁人类健康的疾病之一，20世纪70年代以来，我国癌症发病及死亡率一直 呈上升趋势，至90年代的20年间，癌症死亡率上升29.42％，年龄调整死亡率上升11.56％。 2000年癌症发病人数约180-200万，死亡140-150万。恶性肿瘤发病率全国35岁至39岁年龄 段为87.07/10万，40岁至44岁年龄段几乎翻番，达到154.53/10万；50岁以上人群发病占全 部发病的80％以上，60岁以上癌症发病率超过1％，80岁达到高峰。全国肿瘤死亡率为180.54/10 万，每年因癌症死亡病例达270万例。我国居民因癌症死亡的几率是13％[赫捷,陈万青.(2012). 2012中国肿瘤登记年报.军事医学科学出版社:18-28.McBride,D.J.andA.K.Orpana,etal. (2010)."Useofcancer-specificgenomicrearrangementstoquantifydiseaseburdeninplasmafrom patientswithsolidtumors."GenesChromosomesCancer49(11):1062-1069.]。癌症不仅严重影响 劳动人民的健康，而且成为医疗费用上涨的重要因素。我国每年耗费大量资金用于癌症病人的 医疗费用，带来巨大的经济负担。

在妇科生殖道肿瘤疾病中，子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌位居前三位。子宫颈癌在广泛 普查普治基础上，早期预防工作取得显著成效，发病率和死亡率在一定程度上已大幅下降。子 宫内膜癌的发病有明显上升和年轻化趋势，相对于卵巢癌发病率高。但是卵巢癌的死亡率较高。 癌症的发生是一个渐进缓慢的过程，若能早期筛查和预防，可有效的降低其发生率和死亡率。

癌症的发生时一个渐进缓慢的过程，如能够对其做到早期发现，临床有效治疗，到术后复 发监测进行全面控制，可有效的降低其发生率和死亡率，将有着巨大的经济效益和社会效益。

循环DNA是存在于血液、滑膜液等体液中的细胞外游离DNA，研究发现许多肿瘤患者循 环DNA与正常人相比有很大差异，由于肿瘤细胞凋亡，癌症患者循环DNA中含有一定的肿 瘤标志物。近年来肿瘤患者血液中循环游离DNA的基因检测诊断已成为研究热点，研究显示 血液中循环肿瘤DNA有可能成为一种新的肿瘤早期诊断及预后判断的标志物。检测血液中循 环游离DNA中的肿瘤标志物检测具有区别于传统组织肿瘤标志物检测方式，具有无创、随时 监控和早期筛查等优势，并且对循环游离DNA的取样检测避免了当前分子诊断需要采集癌组 织作为标本来源的困难，是一种很有潜力的肿瘤标志物。同时将血液肿瘤标志物与临床检验结 合起来，可以辅助肿瘤的早期诊断和实时监控或者为肿瘤的早期诊断或监控提供重要线索，有 可能能成为肿瘤的早期筛查和预后判断提供重要依据。

目前临床上对于宫颈癌筛查应用较广的是巴氏涂片法，该方法是一种从子宫颈部获取细胞， 显微镜下检测癌症迹象的诊断方法。目前却还没有适用于卵巢癌和子宫内膜癌的常规筛查方法， 临床应用的细胞学方法、引道超声、CA-125等方法在特异性方面尚不足以满足早期筛查检测， 同时无法区分良恶性肿瘤。如今高通量测序技术已经在肿瘤检测中得到了有效应用，但由于妇 科生殖道肿瘤发病早期的血浆游离DNA含量较低，而且测序技术本身存在一定的错误率等， 采用传统的测序方法将无法分辨测序错误和肿瘤标本中低频率突变，不利于妇科生殖道肿瘤的 早期诊断准确性和灵敏性。因此开发易操作、低损伤、高准确的技术是妇科生殖道肿瘤早期筛 查所急需的。

发明内容