[发明专利]试剂盒及其用途

权利要求书

1.一种试剂盒，其包含探针，所述探针固定在固相基质上或者所述探针游离于溶液中， 所述探针能够特异性识别表1里的43个基因中的至少10个基因的基因区域；

任选地，所述探针能够覆盖所述43个基因中的至少20个基因的基因区域；

任选地，所述探针能够覆盖所述43个基因中的至少30个基因的基因区域；

任选地，所述探针能够覆盖所述43个基因中的至少40个基因的基因区域；

任选地，所述探针能够覆盖所述43个基因的基因区域；

任选地，所述探针的长度为25-300nt。

2.权利要求1的试剂盒，其特征在于，所述探针的获得包括，获得初始探针集以及筛选 所述初始探针集。

3.权利要求2的试剂盒，其特征在于，所述获得初始探针集包括：

确定所述基因区域的参考序列，

从所述参考序列的一端开始，在所述参考序列上依次获取DNA片段直至所述参考序列的 另一端，其中，

一条DNA片段为一条初始探针，全部所述DNA片段构成所述初始探针集，所述DNA片 段之间完全重叠、部分重叠或完全不重叠，所述初始探针集能够覆盖所述基因区域至少一次。

4.权利要求2的试剂盒，其特征在于，所述获取初始探针集包括：

确定所述基因区域在参考基因组上的位置，获取所述基因区域的参考序列，

从所述参考序列一端的第一个核苷酸开始拷贝所述参考序列获取第一条DNA片段，

从所述参考序列一端的第二个核苷酸开始拷贝所述参考序列获取第二条DNA片段，

从所述参考序列一端的第三个核苷酸开始拷贝所述参考序列获取第三条DNA片段，

这样依次获取后续DNA片段直至第N条DNA片段的一端超出所述参考序列的另一端， 其中，

一条DNA片段为一条初始探针，全部所述DNA片段构成所述初始探针集，N为所述初 始探针集中包含的初始探针的总数。

5.权利要求3或4的试剂盒，其特征在于，所述筛选初始探针集包括：

将所述DNA片段与所述参考序列比对，获得每一条DNA片段在参考序列上的比对次数， 过滤掉比对次数超过1的DNA片段。

6.权利要求5的试剂盒，其特征在于，所述筛选初始探针还包括，去除掉GC含量不在 35-70％的DNA片段。

7.权利要求1-6任一试剂盒在获取妇科生殖道肿瘤相关基因序列中的用途。

8.权利要求1-6任一试剂盒在妇科生殖道肿瘤早期筛查中的用途。

9.一种构建目标区域测序文库的方法，其特征在于，包括：

(a)获取待测样本中的核酸，所述核酸由多个核酸片段组成，所述核酸片段来自断裂的 基因组DNA和/或游离的DNA；

(b)末端修复所述核酸片段，获得末端修复片段；

(c)加碱基A至所述末端修复片段的两端，获得粘性末端片段；

(d)连接接头于所述粘性末端片段的两端，获得接头连接片段；

(e)对所述接头连接片段进行第一扩增，获得第一扩增产物；

(f)利用权利要求1-6任一试剂盒对所述第一扩增产物进行捕获，获得所述目标区域； 以及，

(g)对所述目标区域进行第二扩增，获得第二扩增产物，所述第二扩增产物构成所述目 标区域测序文库；

任选地，所述接头末端为T-粘性末端。

10.一种测序方法，其特征在于，包括：

根据权利要求9的方法构建目标区域测序文库；

对所述目标区域测序文库进行测序，获得测序数据，所述测序数据由多个读段组成；

任选地，所述测序为双末端测序，所述测序数据由多对读段对组成。