[发明专利]卡泊三醇的中间体Mb及其杂质的分离测定方法

权利要求书

1.一种高效液相色谱法分离如下式所示的Mb及其杂质的方法，其特征在于：所述方法采用多孔硅胶微粒或十八烷基键合多孔硅胶为填充剂的色谱柱进行分离；

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述杂质包括如下所示的Mb的20S-异构体、E、D、F、VD₂、Mb的1β-异构体和I(Ma)：

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法以乙酸乙酯-正己烷或者三氯甲烷-乙腈或者水-乙醇为流动相。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述色谱柱的规格为4.6×250mm,5μm或4×250mm,5μm；所述流动相的流速为0.8-2.0ml/min。

5.根据权利要求2至4任一项所述的方法，其特征在于：

针对所述Mb、Mb的20S-异构体和E进行分离时，以乙酸乙酯:正己烷体积比2:98为流动相；

针对所述Mb、D和F进行分离时，以三氯甲烷:乙腈体积比8:92为流动相；

针对所述VD₂、Mb的1β-异构体和I(Ma)进行分离时，以水:乙醇体积比10:90为流动相。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：

针对所述Mb、Mb的20S-异构体和E进行分离时，设置流动相流速为1.5ml/min；

针对所述Mb、D和F进行分离时，设置流动相流速为2.0ml/min；

针对所述VD₂、Mb的1β-异构体和I(Ma)进行分离时，设置流动相流速为0.8ml/min。

7.一种高效液相色谱法分离测定Mb及其杂质的方法，其特征在于：在权利要求5所述的方法的基础上，在波长272nm进行检测。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：采用自身对照法进行分析并计算各成分含量。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：

针对所述Mb、Mb的20S-异构体和E进行分离测定时，包括以下步骤：

(1)E定位溶液：称取杂质E约5mg加稀释剂溶解制成0.1mg/mL E定位溶液；

(2)Mb的20S-异构体定位溶液：称取杂质Mb的20S-异构体约5mg加稀释剂溶解制成0.1mg/mL20S-异构体定位溶液；

(3)Mb对照品定位溶液：称取对照品Mb约15mg加稀释剂溶解制成0.6mg/mL Mb对照品定位溶液；

(4)供试品溶液：取供试品约15mg加稀释剂溶解制成0.6mg/mL供试品溶液；

(5)自身对照溶液：精密移取供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加稀释剂溶解制成0.006mg/mL自身对照溶液；

(6)测定方法：设置流动相流速为1.5ml/min，分别取上述溶液20μl进样，记录色谱图，按自身对照法计算各杂质的含量；

针对所述Mb、D和F进行分离测定时，包括以下步骤：

(1)D定位溶液：称取杂质D约5mg加稀释剂溶解制成0.1mg/mL D定位溶液；

(2)F定位溶液：称取杂质F约5mg加稀释剂溶解制成0.1mg/mL F定位溶液；

(3)Mb对照品定位溶液：称取对照品约10mg加稀释剂溶解制成1mg/mL Mb对照品定位溶液；

(4)供试品溶液：取供试品适量，加稀释剂溶解制成1mg/ml供试品溶液；

(5)杂质D贮备液：取杂质D适量，加稀释剂溶解制成0.1mg/ml杂质D贮备液；

(6)杂质F贮备液：取杂质F适量，加稀释剂溶解制成0.1mg/ml杂质F贮备液；

(7)对照品溶液：分别精密移取杂质D贮备液和杂质F贮备液各1.0ml，加稀释剂溶解制成0.001mg/ml对照品溶液；

(8)测定方法：设置流动相流速为2.0ml/min，分别取上述溶液20μl进样，记录色谱图，比较供试品溶液与对照品溶液中杂质的峰面积；

针对所述VD₂、Mb的1β-异构体和I(Ma)进行分离测定时，包括以下步骤：

(1)VD₂定位溶液：称取杂质VD2约5mg加稀释剂溶解制成0.1mg/mLVD₂定位溶液；

(2)I(Ma)定位溶液：称取杂质I(Ma)5mg加稀释剂溶解制成0.1mg/mL I(Ma)定位溶液；

(3)Mb的1β-异构体定位溶液：称取杂质Mb的1β-异构体5mg加稀释剂溶解制成0.1mg/mL Mb的1β-异构体定位溶液；

(4)供试品溶液：取供试品适量，加稀释剂溶解制成1mg/ml供试品溶液；

(5)杂质Mb的1β-异构体贮备液：取杂质1β-异构体适量，加稀释剂溶解制成0.1mg/ml杂质1β-异构体贮备液；

(6)对照品溶液：精密移取杂质1β异构体贮备液1.0ml，加稀释剂溶解制成0.001mg/ml对照品溶液；

(7)测定方法：设置流动相流速为0.8ml/min，分别取上述溶液20μl进样，记录色谱图，比较供试品溶液与对照品溶液中杂质的峰面积；

所述稀释剂为相应的流动相或流动相中的一种有机溶剂。

10.一种固定相及流动相在分离和/或测定Mb及其杂质的色谱法中的应用，所述固定相为多孔硅胶微粒或十八烷基键合多孔硅胶，所述流动相为乙酸乙酯-正己烷或者三氯甲烷-乙腈或者水-乙醇。