[发明专利]检测犬弓形虫IgM抗体的ELISA试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.检测犬弓形虫IgM抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：所述ELISA检测试剂盒以羊抗犬IgM为包被抗原，封闭后加入样本及标准阳性对照、阴性对照，以辣根过氧化物酶标记的弓形虫特异性抗原P22蛋白为标记蛋白，借助该酶标记蛋白，建立捕获法ELISA检测犬弓形虫IgM类型抗体，然后以辣根过氧化物酶底物TMB显色，终止液终止反应，测定各孔吸光度值。

2.根据权利要求1所述的检测犬弓形虫IgM抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括ELISA板条、血清稀释液和浓缩洗涤液、底物显色液、酶标示踪物、终止液、阳性对照、阴性对照。

3.根据权利要求2所述的检测犬弓形虫IgM抗体的ELISA试剂盒，其特征在于：

所述ELISA板条：每个试剂盒装有1块96孔ELISA微孔板，每块ELISA板条为能自行拆卸的已包被羊抗犬IgM单克隆抗体的ELISA微孔板，规格为8孔×12条；

所述血清稀释液为即用型的牛血清白蛋白溶液；

所述洗涤液为25倍浓缩的磷酸盐缓冲液，使用前稀释；

所述底物显色液为即用型TMB显色液，10mL；

所述终止液为2mol/L的H₂SO₄溶液，10mL；

所述酶标示踪物：所述辣根过氧化物酶标记的弓形虫P22抗原，使用前100倍稀释；

所述阳性对照为：经高温灭活的经疫苗免疫后一周内犬血清稀释液。

所述阴性对照为：经高温灭活的未患病且未经疫苗免疫的犬血清稀释液。

4.制备权利要求1所述的检测犬弓形虫IgM抗体的ELISA试剂盒方法，其特征在于：用pH9.6的0.1M的碳酸盐缓冲液作为包被缓冲液，将羊抗犬IgM蛋白稀释后，按100ul/孔加入微孔板中，保证每孔中的羊抗犬IgM含量为0.1ug，4℃包被过夜，次日，弃去包被液，按200ul/孔加入1％BSA的封闭液，37℃静置2小时，洗涤甩干。室温干燥后装入包装袋，加入干燥剂，真空保存。

5.根据权利要求1所述检测犬弓形虫IgM抗体的ELISA试剂盒方法，其特征在于：辣根过氧化物酶标记的弓形虫P22抗原的制备是采用基因重组技术，体外诱导表达、纯化P22抗原；采用过碘酸钠法对上述纯化蛋白进行辣根过氧化物酶标记。

6.权利要求1所述的检测犬弓形虫IgM抗体的ELISA试剂盒在检测犬弓形虫IgM类型抗体中的应用。