[发明专利]草鱼呼肠孤病毒I型II型III型RT-LAMP荧光检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.草鱼呼肠孤病毒I型II型III型RT-LAMP荧光检测试剂盒，包括病毒RNA提取试剂和RT-LAMP荧光反应试剂，其特征在于所述的RT-LAMP荧光反应试剂中含有用于检测草鱼呼肠孤病毒I型、II型和III型的RT-LAMP扩增用核酸引物组和荧光染料，该荧光染料为SYTO 9，该引物组包含引物GCRV1-FIP、引物GCRV1-BIP、引物GCRV1-F3、引物GCRV1-B3、引物GCRV1-LF、引物GCRV1-LB、引物GCRV2-FIP、引物GCRV2-BIP、引物GCRV2-F3、引物GCRV2-B3、引物GCRV2-LF、引物GCRV2-LB、引物GCRV3-FIP、引物GCRV3-BIP、引物GCRV3-F3、引物GCRV3-B3、引物GCRV3-LF、引物GCRV3-LB；

所述的引物GCRV1-FIP序列如SEQ ID NO：1所示；

所述的引物GCRV1-BIP序列如SEQ ID NO：2所示；

所述的引物GCRV1-F3序列如SEQ ID NO：3所示；

所述的引物GCRV1-B3序列如SEQ ID NO：4所示；

所述的引物GCRV1-LF序列如SEQ ID NO：5所示；

所述的引物GCRV1-LB序列如SEQ ID NO：6所示；

所述的引物GCRV2-FIP序列如SEQ ID NO：7所示；

所述的引物GCRV2-BIP序列如SEQ ID NO：8所示；

所述的引物GCRV2-F3序列如SEQ ID NO：9所示；

所述的引物GCRV2-B3序列如SEQ ID NO：10所示；

所述的引物GCRV2-LF序列如SEQ ID NO：11所示；

所述的引物GCRV2-LB序列如SEQ ID NO：12所示；

所述的引物GCRV3-FIP序列如SEQ ID NO：13所示；

所述的引物GCRV3-BIP序列如SEQ ID NO：14所示；

所述的引物GCRV3-F3序列如SEQ ID NO：15所示；

所述的引物GCRV3-B3序列如SEQ ID NO：16所示；

所述的引物GCRV3-LF序列如SEQ ID NO：17所示；

所述的引物GCRV3-LB序列如SEQ ID NO：18所示。

2.如权利要求1所述的草鱼呼肠孤病毒I型II型III型RT-LAMP荧光检测试剂盒，其特征在于所述的RT-LAMP荧光反应试剂包括以下组分：

1）荧光反应液：38～42mM pH为8.5～9.0的Tris-HC1、9～11mM硫酸镁、19～21mM氯化钾、19～21mM硫酸按、0.2% Triton X-100、2.6～2.8 mM dNTP、1.4～1.6 M甜菜碱、0.05～0.1μM SYTO 9、3.0～3.2μM引物GCRV1-FIP、3.0～3.2μM引物GCRV1-BIP、3.0～3.2μM引物GCRV2-FIP、3.0～3.2μM引物GCRV2-BIP、3.0～3.2μM引物GCRV3-FIP、3.0～3.2μM引物GCRV3-BIP、0.3～0.5μM引物GCRV1-F3、0.3～0.5μM引物GCRV1-B3、0.3～0.5μM引物GCRV2-F3、0.3～0.5μM引物GCRV2-B3、0.3～0.5μM引物GCRV3-F3、0.3～0.5μM引物GCRV3-B3、1.4～1.6μM引物GCRV1-LF、1.4～1.6μM引物GCRV1-LB、1.4～1.6μM引物GCRV2-LF、1.4～1.6μM引物GCRV2-LB、1.4～1.6μM引物GCRV3-LF和1.4～1.6μM引物GCRV3-LB； 

2）反应酶：每1.5μL含8个活性单位的Bst DNA聚合酶和5个活性单位的AMV反转录酶；

3）密封液：由矿物油或液体石蜡油组成。

3.如权利要求1所述的草鱼呼肠孤病毒I型II型III型RT-LAMP荧光检测试剂盒，其特征在于所述的病毒RNA提取试剂包含以下组分：含有5～15 mM Tris、120～150 mM NaCl、0.6～1% NP-40、0.1～0.2% SDS、3～5mol/L异硫氰酸胍、1%β-巯基乙醇，pH 8.0的裂解液；异丙醇，浓度100%；异丙醇，浓度55%；乙醇，浓度70%。

4.如权利要求1所述的草鱼呼肠孤病毒I型II型III型RT-LAMP荧光检测试剂盒，其特征是还具有阳性对照试样和阴性对照试样，所述阳性对照试样为草鱼呼肠孤病毒I型II型III型RNA混合物，所述的阴性对照试样为无核酸酶的去离子水。