[发明专利]CD82/ TIMP1在制备抑制人胰腺癌细胞迁移的药物中的应用

说明书

 

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体是CD82/ TIMP1在制备抑制人胰腺癌细胞迁移的药物中的应用。

背景技术

癌细胞转移至今仍然是癌症死亡的主要原因。癌转移是个多步骤的过程，其中第一步是癌细胞由原发部位发生运动迁移，之后进入血循环，随血液到达全身远端部位后生长和增殖，最终形成转移灶。对癌转移发生发展的过程包括其中相关分子机制的全面认识，必将有利于研究者们开发出新型的癌症治疗药物和疗法。在过去的几十年中，随着特异性癌转移抑制基因被逐渐发现，人们对癌转移过程有了越来越多的了解。同时，研究者们还观察到此类抑制因子对原发灶内癌细胞的生长并没有显著的作用，提示这类蛋白是直接或者间接影响了癌细胞及其周围微环境。

TIMP1是基质金属蛋白酶组织抑制因子家族的代表之一，这个家族一共有四个成员。除个别MT-MMPs外，TIMP1对所有的MMPs都有抑制效果，与ADAM-10作用的Kis系数小于nM级。有研究显示，TIMP1在一些特定癌细胞中发生上调，非MMP依赖性地促进癌细胞生长和存活，推动癌症发展。TIMP1通过与未知受体结合，激活下游JAK（或FAK）/PI3K/Akt/Bad-BclXL（红细胞系、骨髓来源细胞系、上皮来源细胞系）或Ras/Raf1/FAK（骨肉瘤细胞系）信号通路。因此，TIMP1对肿瘤发展的作用很可能是双重的：一方面抑制MMPs（如MMP-9）活性和阻碍新生血管形成，另一方面又可以促进癌细胞生长和存活。其中，proMMP9/TIMP1间平衡的失衡很可能是癌症发展的原因，从这个环节中找到的关键分子将是预防和治疗的潜在靶标。

CD82是糖蛋白tetraspanin超家族成员之一，它的主要作用是抑制癌细胞活力和发生侵袭，促进癌细胞极化，在刺激因子作用下引起癌细胞衰老和凋亡。而上述这些都是通过CD82对细胞膜性结构、蛋白细胞内穿梭及相互作用的调控来实现的，其中涉及到一些胞内信号传导通路。CD82从多个方面抑制癌细胞转移，但它本身不具有酶活性。CD82一方面通过调控其结合蛋白在细胞中的运输，另一方面直接影响细胞膜运动，对多条信号通路进行整合。目前，多数研究都集中在体外各种癌细胞系中过表达CD82蛋白，观察其对细胞活力、粘附力或衰老的改变。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供CD82/ TIMP1在制备抑制人胰腺癌细胞迁移的药物中的应用。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

CD82/TIMP1在制备抑制人胰腺癌细胞迁移的药物中的应用，其特征在于，CD82与TIMP1直接结合，引发TIMP1的胞内运输、循环，阻断细胞骨架重塑，减少层形足板/丝足突出形成，抑制细胞活力、迁移。

本发明的有益效果：TIMP1通过胰腺癌细胞膜上CD82增强Akt信号通路，阻断细胞骨架重塑，减少层形足板/丝足突出形成，抑制细胞活力、迁移，且对癌细胞生长无影响。对TIMP1/CD82轴作为抑制肿瘤转移新的信号通路的深入阐释，将有助于我们更加清晰地认识并理解癌症转移的过程，有助于寻找到癌症转移防治的关键节点，具有很好的实用性，可以开发一种新的抑制癌细胞迁移的药物，能够产生较好的经济效益和社会效益。 

附图说明

图1-4为放大200倍下体外伤痕愈合实验；

图5为流式细胞术PI染色法检测PANC-1细胞周期；

图6为放大400倍下绿色荧光鬼笔环肽标记F-actin；

图7为Western blot方法检测PANC-1细胞中CD82干扰前后，TIMP1刺激p-Akt⁴⁷³磷酸化水平。

具体实施方式

为了便于本领域技术人员理解，下面结合附图对本发明作进一步的说明。

人胰腺癌PANC-1细胞系购买自美国ATCC公司；重组TIMP1、CD82-LEL蛋白购买自北京义翘神州生物技术有限公司；环巴胺（cyclopamine）购买自美国Biomol International Lp公司；FITC标记鬼笔环肽购买自                    美国Sigma公司。

1、PANC-1细胞培养于含有10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的DMEM培养液中。