[发明专利]一种大肠杆菌和乳酸杆菌穿梭载体的构建及应用在审
| 申请号： | 201410642134.3 | 申请日： | 2014-11-14 |
| 公开（公告）号： | CN104726360A | 公开（公告）日： | 2015-06-24 |
| 发明（设计）人： | 谢远红;张红星;刘慧;熊利霞;金君华;高秀芝 | 申请（专利权）人： | 北京农学院 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N15/66;C12N15/74;C07K14/335 |
| 代理公司： | 无 | 代理人： | 无 |
| 地址： | 102206 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 大肠杆菌 乳酸 杆菌 穿梭 载体 构建 应用 | ||
【权利要求书】：
1.植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum)Zhang-LL CGMCC No.6936。
2.一种大肠杆菌和乳酸杆菌穿梭载体pZLT3的构建及应用方法，其特征在于：(1)以保藏号为CGMCC No.6936的植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum)Zhang-LL中的内源性天然质粒pZL3为骨架，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1；采用限制性内切酶KpnI和NcoI进行双酶切后，回收酶切后的质粒大片段；(2)以载体pET30a(+)为模板，进行一次PCR扩增，得到含有质粒复制起始点ori的DNA片段和卡那霉素抗性基因表达盒kan，其PCR扩增得到的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：2；采用限制性内切酶KpnI和NcoI将PCR产物进行双酶切后，回收酶切后的PCR产物；(3)将步骤(1)和步骤(2)得到的片段采用T4DNA连接酶进行连接，并将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，挑取转化子，提取质粒，对质粒进行酶切鉴定，得到穿梭载体pZLT3，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；(4)构建的大肠杆菌和乳酸杆菌穿梭载体pZLT3转化干酪乳杆菌KL1，表达乳酸菌细菌素蛋白。
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