[发明专利]一种酶活提高的胰蛋白酶突变体及其构建方法

权利要求书

1.一种酶活提高的胰蛋白酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO.1所示的序列。

2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体是在如序列SEQ ID NO.2所示的氨基酸的基础上，将第123位的精氨酸突变成了异亮氨酸，同时将第1位的酪氨酸突变成了苯丙氨酸。

3.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体的核苷酸序列是SEQ ID NO.3所示的序列。

4.根据权利要求2所述的突变体，其特征在于，所述编码SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的核苷酸序列是SEQ ID NO.4所示的序列。

5.一种含有权利要求1所述突变体的重组表达载体。

6.一种表达权利要求1所述胰蛋白酶突变体的基因工程菌。

7.一种权利要求5所述基因工程菌的制备方法，是在SEQ ID NO.4所示序列的基础上，将第123位的精氨酸突变成了异亮氨酸，同时将第1位的酪氨酸突变成了苯丙氨酸，得到重组基因，将重组基因连接到表达载体得到重组质粒，重组质粒转化到酵母宿主菌中即得到酵母基因工程菌。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述方法具体是：(1)以SEQ ID NO.4所示核酸序列为模板，序列如SEQ ID NO.5所示的F1primer、序列如SEQ ID NO.6所示的R1primer为引物，进行PCR，即得到编码的第123位氨基酸由精氨酸突变成了异亮氨酸的R123I突变体基因序列；(2)以上一步得到的突变体基因序列为模板，序列如SEQ ID NO.7所示的F2primer、序列如SEQ ID NO.8所示的R2primer为引物，进行PCR，即得到序列如SEQ ID NO.3所示的重组基因；(3)将上一步得到的重组基因序列，连接到pPIC9K表达载体中，得到重组质粒pPIC9K-重组基因，重组质粒电转化Pichia pastoris GS115，获得重组酵母工程菌株FemiGS115。

9.根据权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，所述表达载体是以下任意一种：pGAP ZA、pAO815、pGAP αA、pPIC9K、pPIC ZB。

10.根据权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，所述酵母宿主菌是以下任意一种：pichia pastoris GS115、pichia pastoris KM71、pichia pastoris X-33、pichia pastoris SMD1168。