[发明专利]同步检测五种猪病毒的液相基因芯片的核酸及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域。具体而言，提供一组用于同步快速检测鉴别猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪细小病毒(PPV)共五种猪病毒的五重液相基因芯片高通量检测的核酸及其检测方法。

背景技术

(一)、造成猪繁殖障碍等疾病的几种重要猪病毒

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)。猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV)感染猪引起猪繁殖与呼吸系统综合病症(PRRS)，以母猪繁殖障碍、仔猪和育肥猪呼吸道症状为主要特征，是一种高度免疫抑制病和高度传染性疫病。

猪圆环病毒2型(PCV-2)。猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)是迄今发现的一种最小的动物病毒。PCV有PCV1和PCV2两个血清型，其中PCV1为非致病性病毒，PCV2具有致病性。PCV-2是断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome,PMWS)的主要病原，PCV-2所引起的疾病是当今养猪业密切关注的重大传染病之一。PCV-2目前已在世界范围内广泛存在，已被公认为是继猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)之后新发现的引起猪免疫障碍的重要传染病。已证实PCV-2可在猪群中垂直传播，而猪精液是传播PCV-2的重要途径。

猪伪狂犬病病毒(Aujeszky’s disease virus,PRV)。伪狂犬病病毒(PRV)属疱疹病毒科(Herpesviridae)、猪疱疹病毒属。PRV在全世界广泛分布。猪是PRV的贮存宿主，PRV主要通过已感染猪排毒而传给健康猪，猪群中PRV主要通过鼻分泌物传播，也可通过乳汁和精液传播方式。感染PRV对15日龄以内的仔猪发病死亡率可达100％，断奶仔猪发病率可达40％，死亡率20％左右；可引起种猪不育症、生长停滞、增重缓慢等。

猪瘟病毒(CSFV)。猪瘟病毒病(Classical swine fever)是由黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒(CSFV)感染引起的猪的急性、热性、具有高度致死性(死亡率达90％以上)和高度传染性的疫病，被OIE列入疫病名录，被我国列为一类烈性传染病。猪瘟在世界范围内流行，在我国流行多年并引起巨大经济损失。目前虽然已有多个国家开展猪瘟根除计划，但通过接触野猪使猪瘟重返养殖猪群的情况仍时有发生。在育龄猪群中，猪瘟感染并不一定显现明显的临床和病理症状，猪瘟病毒感染力强，防控难度较大。

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)。猪细小病毒病是由猪细小病毒(PPV)引起的一种繁殖机能障碍性疾病，引起母猪繁殖障碍，全球均有发生。

上述五种猪病毒是引起猪繁殖障碍疾病的重要病原，所引起的疫病在养猪业常见多发、防治难度大。其中PRRSV和PCV-2还是造成猪呼吸道疾病综合征的主要致病原。此外，这五种猪病毒在猪体中发生混合感染的情况比较普遍，临床已多次发现2种或3种猪病毒混合感染的情况，在养猪业已造成严重危害。

针对猪群中存在多种临床症状类似的病原体感染的情况，同步检测多种猪病原体的技术能显著提高检测速度，有助于早发现，早防疫。及时发现猪群携带的病原体，可实行消毒、隔离等防疫措施，不仅能及时控制病原体的传播，还能有效降低生产损失。然而，目前已报道的同步检测多种猪病原体的多重检测技术存在非特异干扰、敏感性不理想等问题。

(二)、猪病原体同步快速检测技术现状与液相芯片技术研究概况

猪可感染多种病原，并且呈现相似甚至临床难于鉴别的病症，给疾病的准确诊断带来困难。各国科学家均努力研究开发能同步检测鉴别多种传染病病毒的方法，分子生物学技术的飞速发展为实现猪疫病毒高通量鉴别检测提供了技术基础。

国内外目前已建立的针对猪传染病病毒的同步快速检测技术主要有多重常规PCR、多重荧光PCR和传统固相芯片技术。