[发明专利]检测致病菌的电化学传感器、制备方法及其应用

权利要求书

1.检测致病菌的电化学传感器，包括工作电极，其特征在于所述工作电极为表面修饰有寡聚核苷酸探针2的波碳电极；所述传感器还包括工作液1和工作液2；所述工作液1为标记有抗致病菌抗体的纳米磁珠分散液；所述工作液2为标记有抗致病菌抗体和寡聚核苷酸探针1的金纳米粒子分散液；所述寡聚核苷酸探针1的5’端修饰有亚甲蓝，寡聚核苷酸探针2的3’端修饰有氨基，所述寡聚核苷酸探针1和2的碱基序列互补。

2.根据权利要求1所述检测致病菌的电化学传感器，其特征在于所述寡聚核苷酸探针1的核苷酸序列为5’-GTGCACGGTACGCGAATCGG-3’，所述寡聚核苷酸探针2的核苷酸序列5’-CCGATTCGCGTACCGTGCAC-3’。

3.根据权利要求1或2所述检测致病菌的电化学传感器，其特征在于所述致病菌为空肠弯曲菌。

4.权利要求1所述检测致病菌的电化学传感器的制备方法，其特征在于所述表面修饰有寡聚核苷酸探针2的波碳电极采用如下方法制备：在波碳电极表面沉积氧化石墨烯薄膜，在所述氧化石墨烯薄膜上修饰寡聚核苷酸探针2。

5.根据权利要求4所述检测致病菌的电化学传感器的制备方法，其特征在于所述表面修饰有寡聚核苷酸探针2的波碳电极采用如下方法制备：将波碳电极用氧化铝粉末抛光，在乙醇和水中进行超声清洗；将氧化石墨烯悬浊液滴加在超声清洗后的波碳电极表面，得到表面沉积有氧化石墨烯薄膜的波碳电极；表面沉积有氧化石墨烯薄膜的波碳电极在N-羟基丁二酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液中进行活化，然后在活化后的波碳电极表面滴加寡聚核苷酸探针2溶液，所述寡聚核苷酸探针2的3’端修饰有氨基、核苷酸序列为5’-CCGATTCGCGTACCGTGCAC-3’。

6.根据权利要求4或5所述检测致病菌的电化学传感器的制备方法，其特征在于所述工作液1采用如下方法制备：纳米磁珠采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基丁二酰亚胺活化，然后加入抗空肠弯曲菌抗体进行反应，得到标记有抗空肠弯曲菌抗体的纳米磁珠分散液。

7.根据权利要求6所述检测致病菌的电化学传感器的制备方法，其特征在于所述工作液2采用如下方法制备：

（1）在醋酸溶液中加入三(2-羧乙基)膦和3’端修饰有巯基、5’端修饰亚甲蓝的生物探针，所述生物探针的核苷酸序列为5’-GTGCACGGTACGCGAATCGG-3’，进行反应；

（2）在步骤（1）反应所得混合物中，加入金纳米粒子进行反应；

（3）在步骤（2）所得反应混合物中，加入抗空肠弯曲菌抗体进行反应；然后加入三磷酸脱氧腺苷和牛血清白蛋白进行反应；

（4）步骤（3）所得反应混合物离心，取沉淀重悬于磷酸盐缓冲液中，得到标记有抗致病菌抗体和寡聚核苷酸探针1的金纳米粒子分散液。

8.采用权利要求1-3之一所述电化学传感器检测致病菌的方法，包括如下步骤：

（1）将工作液1与含有不同浓度致病菌的溶液混合，分离纳米磁珠并悬浮于缓冲液中，得到纳米磁珠分散液；

（2）在纳米磁珠分散液中加入工作液2，进行反应；

（3）将步骤（2）获得的混合物滴加到工作电极上进行反应，清洗，在工作电极两端施加电压，检测电流信号，得到致病菌浓度与电流的标准曲线；

（4）将待测样品按照步骤（1）-（3）进行检测，将得到的电流代入标准曲线中，得到待测样品中致病菌的浓度。