[发明专利]一种副溶血弧菌的海水选择性显色培养基及其鉴定计数方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别是涉及一种副溶血弧菌的海水选择性显色培养基及其鉴定计数方法。

背景技术

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus，VP)，是一种常见的病原菌。具体来说，它是一种革兰氏阴性菌，属于弧菌属，广泛存在于河口、海水、海底沉积物等海洋环境以及鱼贝类等海产品中，可以以水和水生动物为媒介感染。它不仅严重危害海水养殖业，还能引发人类胃肠炎等食物中毒病，是一种重要的病原菌。近年来，由于误食受副溶血弧菌污染或加工不当的海产品而的食物中毒事件层出不穷，在我国部分沿海地区细菌性食物中毒中毒居首位。副溶血弧菌感染的症状主要有恶心、呕吐、腹泻以及发热等，严重时甚至会出现脱水、休克昏迷甚至死亡。此外，副溶血弧菌还可能引发伤口感染，严重的可导致败血症进而导致或者死亡。

副溶血弧菌可以以水为媒介感染进而感染人，当伤口接触含有该菌的海水，可能会引发伤口感染，严重时可以引起败血症甚至死亡，严重威胁人类的健康和安全，是海洋环境安全的一个潜在的威胁。因此，在海洋环境特别是浴场环境中关于副溶血弧菌的检测和计数统计，对于浴场安全风险评价评估具有重要的意义。目前，在副溶血弧菌的鉴定方面主要有传统的检测方法、分子生物学检测方法、色谱法、免疫学检测方法等，然而这些方法均不能够进行计数的统计分析。此外，在浴场环境下副溶血弧菌的鉴定和计数方面，属空白领域。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的技术缺陷，而提供一种副溶血弧菌的海水选择性显色培养基，同时还提供了应用该海水选择性显色培养基对副溶血弧菌进行鉴定计数方法。

为实现本发明的目的所采用的技术方案是：

一种副溶血弧菌的海水选择性显色培养基，其特征在于，海水选择性显色培养基中每1000mL含有牛肉膏3-10g、蛋白胨5-15g、硫代硫酸钠5-15g、柠檬酸钠3-10g、胆碱3-10g、β-葡萄糖苷0.1-1g、蔗糖10-20g和琼脂15-22g，余量为海水，自然pH。

优选的，上述海水选择性显色培养基中每1000mL含有牛肉膏3g、蛋白胨6g、硫代硫酸钠8g、柠檬酸钠10g、胆碱8g、β-葡萄糖苷0.3g、蔗糖20g和琼脂20g，余量为海水，自然pH。

应用上述海水选择性显色培养基对副溶血弧菌进行鉴定计数的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)制备海水选择性显色培养平板：将海水选择性显色培养基加热煮沸灭菌，待冷却至50～60℃，倒平板，备用；

(2)海水水样的过滤：采用无菌取样瓶采集新鲜海水水样10～100mL，用0.22μm的滤膜对海水水样进行过滤；

(3)贴膜培养：采用无菌镊子将步骤(2)中过滤后的滤膜取下，平移贴至步骤(1)中制备好的海水选择性显色培养平板的表面上使滤膜与平板之间紧贴无气泡；

(4)将步骤(3)中贴膜后的培养基置于28℃条件下进行培养，培养时间为18-20h；

(5)对步骤(4)培养后的平板上出现的紫红色菌落进行统计计数，得到每百毫升海水样中副溶血弧菌的个数。

所述步骤(1)海水选择性显色培养基的每1000mL中含有牛肉膏3-10g、蛋白胨5-15g、硫代硫酸钠5-15g、柠檬酸钠3-10g、胆碱3-10g、β-葡萄糖苷0.1-1g、蔗糖10-20g和琼脂15-22g，余量为海水，自然pH。

优选的，所述步骤(1)海水选择性显色培养基的每1000mL中含有牛肉膏3g、蛋白胨6g、硫代硫酸钠8g、柠檬酸钠10g、胆碱8g、β-葡萄糖苷0.3g、蔗糖20g和琼脂20g，余量为海水，自然pH。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

(1)以显色培养基代替传统的分离鉴定方法，通过显色反应可以直接对副溶血弧菌进行鉴定，方便快捷；

(2)以海水进行培养基的配制，可以促进海水中弧菌的快速的生长；

(3)鉴定和计数步骤简单，从取样到结果只需20-24小时即可完成，节省了大量的时间和操作步骤，不需要使用复杂的仪器，鉴定和计数成本底，有利于在基层检测部门进行推广和应用，大幅提高检测的准确度和效率。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1：