[发明专利]一种适于流式细胞分析的茄子叶片细胞核提取方法

权利要求书

1. 一种适于流式细胞分析的茄子叶片细胞核提取方法，其特征在于，其所用的细胞核提取缓冲液组分为：

CPW盐溶液：KH₂PO₄ 27.2mg/L, KNO₃ 101.0mg/L, CaCl₂.2H₂O 1480.0mg/L, MgSO₄.7H₂O 246.0mg/L, KI 0.16mg/L, CuSO₄.5H₂O 0.025mg/L, pH 5.8；

0.5M 甘露醇mannitol，3mmol/L的4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES，0.25%（w:v）PEG，0.5%（v:v）Triton X-100，0.25%（v:v）巯基乙醇，pH6.5-7.0。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其包括如下步骤：

1） 取样：于晴天上午从健壮植株上取0.5~1克嫩叶，用自封塑料袋盛装后置于4℃低温冰箱保存待用；

2） 制备细胞核悬浮液：将取好的0.5~1克茄子嫩叶加入5~10毫升的细胞核提取缓冲液，在4℃条件下用锋利的单面刀片将其切碎，过滤至离心管中，4℃静置孵育10~15分钟；1000r/min离心10分钟后，弃上清，沉淀加细胞核提取缓冲液冲洗一次后过滤，即获得细胞核悬浮液；

3） 染色：在制备好的细胞核悬浮液中先加入终浓度为50ug/ml的核酸内切酶RnaseA，消化10分钟后，加入DNA荧光染料碘化丙啶PI，4℃染色30分钟以上后，用500目的尼龙网再过滤一次，上样检测。

3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3）中，上样检测是指在美国BD公司的流式细胞仪上进行样品检测，使用低速收集细胞核，并显示FL2直方图，横坐标以相对DNA含量反映荧光曲线的面积，纵坐标为细胞核数。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，步骤3）中，在制备好的细胞核悬浮液中先加入终浓度为50ug/ml的核酸内切酶RnaseA，消化10分钟后，再加入DNA荧光染料碘化丙啶PI。

5.    根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，步骤3）中，4℃染色30分钟以上后，用500目的尼龙网再过滤一次。