[发明专利]一种纤维二糖差向异构酶全细胞的固定化方法

权利要求书

1.一种纤维二糖差向异构酶全细胞的固定化方法，其特征在于，是将产纤维二糖差向异构酶的全细胞经透化处理后，加入助滤剂、壳聚糖和三聚磷酸钠(TPP)，待菌体絮凝后，弃去上清液，即得固定化细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述透化处理，是指将产纤维二糖差向异构酶的细胞悬浮于透化试剂溶液中，使细胞终浓度为每100mL溶液中含有干重为0.01-5g的细胞，于4-30℃下混匀5-120min处理，即得到透化细胞。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述透化试剂溶液是以下任意一种或者多种的混合：以每100mL溶液中的终浓度来计，含有1-90mL的乙醇或0.1-5mL的甲苯或0.01-5g的十六烷基三甲基溴化铵或0.1-5mL的异戊醇。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固定化方法具体是在经透化处理过的细胞干重为0.01-5g每100mL的细胞菌悬液中加入助滤剂混合均匀后，再加入壳聚糖溶液使每100mL溶液中含有壳聚糖为0.01-1g，再加入TPP溶液使每100mL溶液中含有TPP为0.01-1g，菌体絮凝后，弃去上清液，即得到固定化细胞。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述固定化方法的步骤为：(1)调节经透化处理过的菌体细胞浓度至每100mL溶液中含有干重为0.1-5.0g的细胞，调节pH至3.0-8.0，形成菌悬液；(2)向步骤1的菌悬液中每100mL加入0.1-1.0g的助滤剂，混合均匀，形成混合溶液；(3)将壳聚糖溶液加入到步骤2所得的混合溶液中，使体系中每100mL溶液中含有壳聚糖质量为0.01-1g；(4)加入TPP溶液到步骤3得到的溶液中，使得最终体系中100mL溶液中TPP质量为0.01-1g，混合均匀，待菌体絮凝后，弃去上清液，即得到固定化细胞。

6.根据权利要求1-5任一权利要求所述的方法，其特征在于，所述菌体絮凝后，向每100mL弃去上清的菌体絮凝物中加入1-100mL交联剂体积分数为0-2.5％的交联剂溶液，于4-30℃下交联0-5h，弃去上清液，得到固定化细胞。

7.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述菌悬液是发酵液离心收集的菌体经透化处理后直接悬浮或者制备成菌粉后再悬浮于缓冲液中。

8.根据权利要求1或4或5任一权利要求所述的方法，其特征在于，所述得到的固定化细胞挤压成型后于20-50℃下烘干或者冷冻干燥得到固定化细胞颗粒。

9.一种根据权利要求1所述方法得到的固定化细胞。

10.一种利用权利要求8所述固定化细胞颗粒生产乳果糖的方法，是(1)将乳糖用缓冲液配制成50-800g/L，调节pH至6.0-10作为底物溶液；(2)将固定化细胞加入底物溶液，转化条件为：固定化细胞的加酶量为0.1-100U/mL，初始pH6.0-10.0，反应温度为40-95℃，反应时间为0.1-12h。