[发明专利]一种测定物质抗氧化活性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定物质抗氧化活性的方法，具体涉及该测定物质抗氧化活 性的方法在药品、食品及其保健品研究方面的应用，属于药品、食品及其保健品 研究领域。

背景技术

机体自由基过量(氧化应激，Oxidativestress)可以引起生物膜脂质、蛋白 质和DNA的氧化性损伤，导致癌症、衰老、动脉硬化以及多种老年慢性疾病。

抗氧化剂能够通过干扰活性氧自由基链锁反应的启动和蔓延，最终阻断自由 基反应过程，起到有效减少氧自由基毒害作用。人体通过补充抗氧化剂，调节体 内氧化还原平衡，达到预防、治疗与氧化应激相关疾病的目的。因此，种类繁多 的各种抗氧化的药物，食品及饮料被广泛开发生产。

目前，体外分析抗氧化活性的方法有以下几类：(1)抗氧化剂与稳定自由 基的反应，如：galvinoxyl、DPPH(1，1-二苯基-2-三硝基苯肼， 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)，ABTS·⁺(2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸) 二铵盐，2,2’-azinobis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonicacidcationradical；(2)采 用竞争反应测定，如：抗氧化能力指数测定法(oxygenradicalabsorbancecapacity ORAC)；(3)通过测定物质对金属离子Fe(Ⅲ)、Cu(Ⅱ)的还原能力，来反映 抗氧化能力；(4)测定总抗氧化能力(totalantioxidantcapacityTAC)。

关于药物、食品及其保健品的抗氧化活性测定的体外方法虽然很成熟，但是 体外分析中所使用的化学评价结果是否能直接应用于生物体系，始终未能解决。 体外分析中所使用的化学体系，与体内试验中的生物体系，两者截然不同。

在这种情形之下，采用传统的体外分析方法，测定的结果并不可靠。

而采用生物标记方法的体内分析结果就较为可靠。但是，体内试验的受试对 象是人或者动物，实验成本高、试验周期长，操作麻烦等，并不适合药物的前期 筛选。药物的生物利用度和体内代谢也会影响到药物在体内的抗氧化活性，导致 检测结果的不准确。

本发明公开了一种测定抗氧化活性的方法，采用体内测定方式，可以使用不 同的氧化应激因子，测定单一化合物和混合物，且具有测定结果准确、操作方法 简单，测定仪器易得、成本低廉的优点。

发明内容

本发明的目的是提供了一种评价药物、食品及其保健品等的抗氧化能力的方 法，具体为一种测定物质抗氧化活性的方法，本发明的另一目的是提供一种测定 物质抗氧化活性的方法在药品、食品及其保健品研究方面的应用。

该方法为：以大肠杆菌为模型，供试样品预先与大肠杆菌培养，然后加入氧 化剂，继续培养，采用光电比浊法，测定细菌生长情况，供试样品的抗氧化活性 与供试样品对细菌氧化应激的保护作用呈正相关性，可采用细菌存活率来反映供 试样品抗氧化活性的大小，计算公式如下：

存活率(％)＝(药物组OD/阴性对照组OD)×100％，其中OD为optical density(光密度)的缩写。

其中，所述的大肠杆菌为：处于对数期的大肠杆菌。

其中，所述大肠杆菌为：标准菌株CMCC(B)44102。

其中，所述的氧化剂为过氧化氢，过氧化氢的实验浓度为75mM。

其中，所述的光电比浊法检测OD(光密度)时采用波长为600nm。

其中，所述的采用光电比浊法测定细菌生长情况时的检测时间为供试样品预 先与大肠杆菌培养3h。

其中，供试样品为水溶性物质、或脂溶性物质。

其中，所述的水溶性物质在检测前溶解于生理盐水，脂溶性物质在检测前溶 解于二甲基亚砜或者乙醇。

本发明还提供一种测定物质抗氧化活性的方法在药品、食品及其保健品抗氧 化活性测定方面的应用。

本发明还提供一种测定物质抗氧化活性的方法在研究具有抗氧化活性药物 的构效关系方面的应用。