[发明专利]黄瓜抗番木瓜环斑病毒病基因prsv的Indel标记及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术辅助育种技术领域，特别涉及一种黄瓜中抗番木瓜环斑病毒基因prsv的Indel标记及其在黄瓜育种材料选择中的应用。

背景技术

病毒病是影响黄瓜生产的主要病害之一，病原种类繁多，难以防治。其中番木瓜环斑病毒(Papaya ring spot virus，PRSV)就是引起该病的一种主要病原。PRSV是一种以蚜虫传播为主的马铃薯Y病毒属病毒，一般在夏末秋初时传播较快，因为在这个时候携带病源蚜虫数量的增加大大提高了病毒的蔓延速率，一旦植株染上病毒病，一般可减产10％～20％，重者可达40％～50％，甚至绝产，而且严重降低了瓜类商品品质。

目前，已经挖掘了一些抗PRSV的黄瓜种质资源，而且前人也利用了其中一些抗病材料对黄瓜PRSV抗性遗传规律及分子标记进行了初步研究，Wang等(1984)利用黄瓜抗病材料Surinam Local和感病材料Wisconsin2757杂交得出PRSV-W受一对隐性基因prsv-1控制；Wai和Grumet(1995b)在TMG-1中发现PRSV抗性是由单显性基因PRSV-2决定的；随后，Wai等(1997)证实prsv-1和PRSV-2互为等位基因；张海英等(2005)以感病亲本自交系欧洲八号、抗病亲本自交系秋棚构建的RILs群体为材料，对PRSV-W进行了抗病性鉴定，研究表明抗病性状是受隐性单基因控制的，但同时也存在微效基因的修饰。目前报道的与PRSV抗性相关的遗传连锁标记有AFLP、RAPD标记，但是这些标记与抗病基因连锁距离较远，且尚未将其定位在染色体上。

发明内容

本发明基于上述领域的不足，提供了与黄瓜中抗PRSV基因prsv紧密连锁的Indel标记，并提供了该标记在筛选对PRSV抗感的黄瓜种质资源上的应用。

本发明的技术方案如下：

一种与黄瓜中抗番木瓜环斑病毒基因prsv连锁的Indel标记，其特征在于：所述标记的引物的核苷酸序列如下：

prsvInde2-F/prsvInde2-R：

CTTCCCCATCATCATACATC/AAGCAGGAGAATGAAACAAC；

所述引物扩增的与黄瓜中感番木瓜环斑病毒基因PRSV连锁的特征条带为176bp，其核苷酸序列如Seq ID No.1所示；

所述引物扩增的与黄瓜中抗番木瓜环斑病毒基因prsv连锁的特征条带为170bp，其核苷酸序列如Seq ID No.2所示。

所述Indel标记在筛选具有抗番木瓜环斑病毒基因prsv的黄瓜种质资源中的应用，其步骤如下：

(1)采用上述Indel标记的引物对待选黄瓜材料的基因组DNA分别进行PCR扩增；

(2)对扩增结果进行凝胶电泳检测；

(3)从检测结果中筛选出现与抗番木瓜环斑病毒基因prsv连锁的Indel标记特征条带一致的材料。

所述PCR扩增的反应体系为:1.5ng/ul DNA模板，所述引物正向和反向各5ng/ul，0.5μL/ul GoGreen Master Mix，其余为双蒸水。

所述PCR扩增的程序为：94℃预变性4分钟；94℃变性15秒，55℃退火15秒，72℃延伸30秒，35个循环；72℃保温5分钟，16℃保存。

所述凝胶电泳检测，指采用6％的非变性聚丙烯酰胺凝胶，于150V恒功率电泳分离，最后银染显色。

本发明以感PRSV高代自交系65G与抗PRSV高代自交系02245为亲本构建F1、F2群体及F2:3家系，通过苗期人工接种鉴定和ELISA检测，对黄瓜PRSV抗性基因prsv进行了遗传规律分析。以F2群体为作图材料，利用BSA法和SSR及Indel标记技术，实现prsv基因在染色体上的遗传定位，并获得紧密连锁的Indel标记prsvIndel2，与prsv的遗传距离为1.6cM。所述Indel标记扩增的与黄瓜PRSV感病基因PRSV连锁的特征条带为176bp，核苷酸序列如Seq ID No.1；所述Indel标记扩增的与黄瓜PRSV抗病基因prsv连锁的特征条带为170bp，核苷酸序列如Seq ID No.2所示。

本发明通过利用35份不同遗传背景的黄瓜资源进行验证，结果表明prsvIndel2验证的正确率为85.7％，而对其中的24份抗性材料验证的正确率高达95.8％。