[发明专利]一种DNA捕获探针的制备方法及应用

权利要求书

1.一种DNA捕获探针的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)针对基因组中感兴趣区域设计特异的扩增引物，利用扩增引物扩增所述感兴趣区域得扩增产物；

(2)采用超声处理的方法将所述扩增产物打断为DNA片段；

(3)对DNA片段进行生物素标记；

(4)经过步骤(3)后，从所述DNA片段中分离得到标记有生物素的DNA单链，得DNA捕获探针。

2.根据权利要求1所述一种DNA捕获探针的制备方法，其特征在于：所述感兴趣区域为人线粒体DNA。

3.根据权利要求1所述一种DNA捕获探针的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)具体包括以下步骤：将扩增产物稀释至10ng/μL，然后取100μL稀释后的扩增产物放入超声仪中进行超声处理，超声仪的输出功率为1000Hz，超声处理次数为90次，单次超声处理时间为15秒，两次超声处理间间隔15秒。

4.根据权利要求1所述一种DNA捕获探针的制备方法，其特征在于：进行生物素标记前，对步骤(2)得到的DNA片段按照片段大小进行纯化，然后进行生物素标记，所述纯化的方法包括以下步骤：向经过步骤(2)处理的100μL 10ng/μL扩增产物中加入核酸纯化磁珠后进行混匀，然后静置5min；静置后置于磁架上，待核酸纯化磁珠被吸附后，吸弃上清；然后用70％乙醇洗涤核酸纯化磁珠，洗涤后晾干核酸纯化磁珠，用水重悬晾干后的核酸纯化磁珠后置于磁架上，待核酸纯化磁珠被吸附后，转移上清，该上清中含有纯化后的DNA片段。

5.根据权利要求4所述一种DNA捕获探针的制备方法，其特征在于：所述核酸纯化磁珠的加入量为90μL，70％乙醇的用量为每次洗涤使用500～750μL。

6.根据权利要求1所述一种DNA捕获探针的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)具体包括以下步骤：

(a)用亲和素包被的磁珠吸附生物素标记成功的DNA片段；

(b)经过步骤(a)后，用氢氧化钠水溶液洗涤所述亲和素包被的磁珠，将所述DNA片段中未标记生物素的DNA单链从所述亲和素包被的磁珠上去除；

(c)经过步骤(b)后，用去离子甲酰胺重悬所述亲和素包被的磁珠并于95℃加热10min，使所述生物素与所述亲和素分离，然后分离得到标记有生物素的DNA单链。

7.根据权利要求6所述一种DNA捕获探针的制备方法，其特征在于：所述氢氧化钠水溶液的浓度为1.25mM。

8.一种如权利要求1所述DNA捕获探针的制备方法制备的DNA捕获探针在从人全基因组测序文库中捕获人线粒体DNA文库的应用。

9.根据权利要求8所述一种DNA捕获探针的制备方法制备的DNA捕获探针在从人全基因组测序文库中捕获人线粒体DNA文库的应用，其特征在于：DNA捕获探针的用量为所述测序文库质量的2～2.5％。