[发明专利]一种孕甾烷生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于天然抗菌药物技术领域，具体涉及从顶花板凳果中提取分离得到的一种孕甾烷生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用。

背景技术

众所周知，由于抗生素的滥用，各种细菌的耐药性问题日益突出，无药可治的细菌感染将严重影响人类的生存。特别是近二十年来，随着新型抗菌药物的发明和使用，各种致病菌的新型耐药性也伴之而来，事实表明目前新抗生素的研发速度完全跟不上细菌变异产生耐药性的速度，造成了临床用于耐药菌的有效抗菌药物正日趋减少，形势愈发严峻，为有效对抗日益严重的耐药细菌，寻找具有新型结构且不易产生诱导耐药的抗菌药物，已经成为全世界高度关注的焦点和当今各国相关学科研究的当务之急。

 时至今日，在全球新上市的药物中，直接或间接来自于天然产物或其衍生物的仍占较大比重。生物碱类化合物是人类研究最早和最多的具有生物活性的一类天然有机化合物，往往是众多天然药物的有效成分，已有大量单体成分及其衍生物应用于临床。黄杨科植物富含生物碱类成分，由于药理活性广泛，该科许多植物长久以来已被药用，如细叶黄杨、金丝矮陀陀、顶花板凳果、野扇花、东方野扇花、长柄野扇花、大叶野扇花等均为较有名的药用植物。板凳果属植物隶属于黄杨科，共有三个种，美洲产一种，我国产有两个种和两个变种，分别为顶花板凳果、板凳果、多毛板凳果和光叶板凳果，其中顶花板凳果的干燥全草在陕西俗名为“捆仙七”，是秦岭“太白七药”之一，从该植物获得的生物碱化合物隶属于孕甾烷类富贵草型生物碱，对该生物碱化合物进行抑菌杀菌试验，对耐药菌表现出全程的生长抑制作用及良好的杀菌活性。

发明内容

 本发明涉及一种来源于顶花板凳果的孕甾烷生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用。本发明涉及的孕甾烷生物碱类化合物是从顶花板凳果中分离提取出来，用于对抗日益严重的耐药细菌，寻找具有新型结构且不易产生诱导耐药的抗菌药物。

本发明的技术方案是：一种孕甾烷生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用，所述孕甾烷生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用，所述孕甾烷生物碱类化合物分子式为C₂₈H₄₆N₂O₂，化学名称为20α-二甲胺基-3β-二甲烯丙酰胺基-16β-羟基-孕甾-5(6)-烯，简称为DSHP，化学结构式如下：

 

所述孕甾烷生物碱类化合物的来源是从顶花板凳果干燥全草中提取获得。

所述孕甾烷生物碱类化合物的提取方法具体步骤如下：

步骤1）取顶花板凳果干燥全草15 kg，经剪碎后，加入20 L质量百分比浓度为90%的乙醇进行回流提取，共提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收溶剂，得浓缩的乙醇提取物；步骤2）将浓缩的乙醇提取物分散于10 L水中，用质量百分比浓度2%稀盐酸调整pH值至2，抽滤除去不能溶解物质得酸性母液；步骤3）用质量百分比浓度4%氨水调整酸性母液pH值至9，得到的碱性溶液用等体积石油醚进行萃取脱脂，而后碱水层再用等体积的氯仿萃取两次，浓缩后得氯仿萃取物即为总生物碱；

步骤4）对总生物碱用氧化铝柱层析进行分离提纯，接收流份，并用硅胶薄层层析检测，收集R_f值在0.25～0.40处显示黄色斑点的流份进行ODS反相柱层析，以甲醇-水的混合溶剂洗脱，接收流份经薄层层析检测，合并含该孕甾烷生物碱类化合物的第19～26流份，减压蒸干溶剂后得浓缩物，浓缩物用甲醇溶解，再采用Sephadex LH-20凝胶柱层析除去大分子类杂质，接收流份进行薄层层析检测，合并含该孕甾烷生物碱类化合物的第15～22流份，减压蒸干溶剂后得到浓缩物，该浓缩物再采用半制备型高效液相色谱进行分离纯化，得到该孕甾烷生物碱类化合物纯品。

所述的对总生物碱用氧化铝柱层析进行分离提纯：以氯仿-甲醇-水的混合溶剂进行梯度洗脱，取下层作为洗脱液，洗脱液的体积比依次为30:1:0、20:1:0、10:1:1、8:1:1、9:2:1、5:2:1、7:3:1和6.5:3:1，每个梯度洗脱液用量为2 L，按500 mL为1个流份接收。

所述硅胶薄层层析检测，展开剂为15:4:1氯仿-甲醇-水混合溶剂的下层，显色剂为改良的碘化铋钾溶液。

所述ODS反相柱层析，以甲醇-水的混合溶剂洗脱，洗脱液的体积比依次为1:2，1:1，2:1，3:2和5:1，每个梯度洗脱液用量为400 mL，按50 mL为1个流份接收。