[发明专利]miRNA-199a在制备诊断试剂盒中的用途

说明书

技术领域

本发明属于基因工程和医学诊断领域，具体涉及一种miRNA的用途，更具体的涉及miRNA-199a在诊断肝癌方面的用途。

背景技术

肝癌是世界上第五大常见的癌症，也是死亡率排行第三的癌症。80％的肝癌常与慢性乙型肝炎病毒和/或丙型肝炎病毒感染有关。如此高的致死率是因为缺乏敏感而特异的无创性指标来进行早期诊断。由于早期肝癌症状不明显，通常在晚期才得以确诊，那时，由于大多存在癌细胞肝内或/及肝外转移，病人已经丧失了手术切除病灶的机会。目前，肝癌的诊断主要依赖于影像学上发现肝内肿物，包括超声、CT、核磁共振(MRI)等，同时结合血清中的肿瘤标志物如AFP等。但是，这两种方法的敏感性及特异性都不是十分令人满意。

Exosomes是一种纳米级的小囊泡状结构，存在于血液或其他生物体液中。它形成于众多细胞(包括树突状细胞和肿瘤细胞)的胞吐作用。Exosomes的外膜是由脂质双分子层组成，其成分包含有选择性蛋白、mRNA和miRNA。在Exosomes中包含有大于120种的miRNA，exosome中的miRNA可以影响干细胞变异(let-7)、器官形成(miR-1)、造血作用(miR-181)、肿瘤发生(miR-17、miR-18、miR-19a、miR-20、miR-19b-1、miR-93-1)以及新陈代谢。

miRNA是一类小的非编码的RNA，它们在细胞的增殖、分化及凋亡过程中发挥了重要的作用。miRNA通过结合在靶mRNA的3’-非编码区的特异位点上来抑制翻译或使靶mRNA降解。miRNA的失调可导致内环境的紊乱，最终导致肿瘤的发生。位于肿瘤相关的基因区域或脆性位点的miRNA基因在肿瘤中常常会扩增或缺失，这意味着miRNA在恶变过程中发挥了重要作用。miRNA可作为癌基因或抑癌基因，几乎所有的人类肿瘤中都可以发现miRNA的失调。miRNA能以稳定的形式在人类的体液如血清、血浆中检测到，这使它有可能成为无创的检查指标。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种能够用于诊断肝癌的新的miRNA标志物及其在制备肝癌诊断试剂盒中的应用。

本发明的目的之二在于提供上述miRNA标志物的检测试剂及其在制备肝癌诊断试剂盒中的应用。

本发明的目的之三在于提供一种检测上述miRNA标志物的方法。

为了实现上述目的，本发明采取了如下的技术方案：

本发明提供了一种与人类肝癌相关的血液miRNA标志物，所述标志物是血液exosome来源的miRNA-199a，其序列信息如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供了与人类肝癌相关的血液miRNA标志物在制备诊断人类肝癌的试剂盒中的应用，所述标志物是血液exosome来源的miRNA-199a，其序列信息如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供了上述与人类肝癌相关的血液miRNA标志物的检测试剂。所述试剂包括QPCR实验中使用的反转录引物和/或扩增引物；所述反转录引物为Oligo(dT)特异性的RT引物；所述扩增引物的上游引物序列如SEQ ID NO.2所示，所述扩增引物的下游引物为通用反向引物。在本发明的一个具体的实施方案中，所述通用反向引物购自北京旷博生物技术有限公司。

本发明还提供了与人类肝癌相关的血液miRNA标志物的检测试剂在制备诊断人类肝癌的试剂盒中的应用，所述试剂包括QPCR实验中使用的反转录引物和/或扩增引物；所述反转录引物为Oligo(dT)特异性的RT引物；所述扩增引物的上游引物序列如SEQ ID NO.2所示，所述扩增引物的下游引物为通用反向引物。在本发明的一个具体的实施方案中，所述通用反向引物购自北京旷博生物技术有限公司。所述诊断试剂盒包含上述引物序列。

本发明还提供了一种诊断人类肝癌的试剂盒，所述试剂盒包含与人类肝癌相关的血液miRNA标志物的检测试剂，所述试剂包括QPCR实验中使用的反转录引物和/或扩增引物；所述反转录引物为Oligo(dT)特异性的RT引物；所述扩增引物的上游引物序列如SEQ ID NO.2所示，所述扩增引物的下游引物为通用反向引物。在本发明的一个具体的实施方案中，所述通用反向引物购自北京旷博生物技术有限公司。

优选地，本发明的诊断试剂盒还包含QPCR常用的试剂和酶，所述常用试剂包含PCR反应缓冲液、核糖核酸酶抑制剂、dNTP等；所述酶包含M-MLV逆转录酶、poly A多聚酶。还可以包括标准品和/或对照品。

具体来说，本发明解决技术问题的技术方案包括：