[发明专利]利用MyoG基因培育京海黄鸡快长系的方法

说明书

技术领域

本发明涉及家禽育种领域，具体涉及一种利用MyoG基因培育京海黄鸡快长系的方法。

背景技术

随着我国经济的发展，人民生活水平的不断提高，优质鸡逐步成为城乡人民消费的主流肉食品之一。畜禽的产肉能力及肌肉品质均与肌纤维的数量和类型密切相关。高生长速度，优良的肉质性状一直是肉用动物长期以来的育种目标。运用候选基因法，鉴定分离出与生长性状遗传变异相关的分子标记，有利于对家禽经济性状的有效选择。

动物胚胎以及成体骨骼肌的发育均依赖于生肌调节因子家族的精准调控，肌细胞生成素(MyoG)基因是生肌调节因子家族的成员之一，MyoG基因的遗传变异与肌肉的生成相关，并最终导致产肉量的变异，研究MyoG基因对提高京海黄鸡的产肉能力具有重要的意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种利用MyoG基因培育京海黄鸡快长系的方法，该方法利用MyoG基因的突变对京海黄鸡的各周龄体重进行标记辅助选择，不受环境影响。

本发明公开了利用MyoG基因培育京海黄鸡快长系的方法。

基于上述应用的利用MyoG基因培育京海黄鸡快长系的方法：提取待测样本的鸡基因组DNA，经序列如SEQ ID NO：1-2所示的特异性引物扩增得到152bp的片段，目的片段经SSCP分析，凝胶电泳后用银染显色，得到DNA的SSCP图谱，根据图谱中的带型筛选基因型为CC的个体。

本发明的原理是：针对MyoG基因设计1对引物(P1)，引物P1扩增产物存在3种基因型，测序结果与MyoG基因原序列(GenBank ID：：NC_006113.3)比对发现，在外显子3序列的36bp处有T-C的点突变。统计分析表明CC型个体的2-16周龄均显著或极显著的高于TT型(P<0.05或P<0.01)。CC纯合型能够在后代中加以固定，该检测方法简单快捷，且不受外界环境的影响，可以作为培育京海黄鸡快长系的方法。

附图说明

图1是MyoG基因扩增产物的PCR-SSCP图谱。

图2是京海黄鸡MyoG基因不同基因型的序列比较。

具体实施方式

实施例

1.1实验动物

随机采取江苏京海禽业集团有限公司同一批次的378只京海黄鸡母鸡血样。翅静脉采集血样1.5mL，肝素钠抗凝，采用酚氯仿抽提法提取鸡基因组DNA，溶于TE，NANODROP1000核酸浓度测定仪测定浓度和纯度后-20℃保存备用。1.2引物设计与PCR扩增

根据GenBank中已发表的MyoG基因序列(登录号为：NC_006113.3)，采用Primer 3.0设计1对引物，扩增产物大小为152 bp。引物序列如下：

P1：F：5′-CTTTGCGCCAGCTCAGTT-3′(SEQ ID NO：1)

    R:5′-CTCCCCCTCCTCTCTCAGAT-3′(SEQ ID NO：2)

PCR反应体系为20μL，包括10×Buffer 2μL，MgCl₂(25 mmol/L)2.2μL，dNTPs(10 mmol/L)0.8μL，上下游引物(10μmol/L)各1μL，模板1μL，Taq酶0.2μL，补双蒸水11.8μL至20μL。反应条件为94℃预变性5 min；31个循环(94℃变性45 s，56.3℃退火40 s，72℃延伸35 s；最后72℃延伸性10 min，4℃保存产物。PCR产物用10％非变性聚丙烯酰胺凝胶检测。

1.3 SSCP分析和测序

将2μL PCR产物和7.5μL上样缓冲液(98％去离子甲酰胺、0.025％溴酚蓝、0.025％二甲苯FF、10 mmol/L EDTA(pH 8.0)、2％甘油)混合，98℃变性10 min后，迅速冰浴10 min，10 V/cm进行非变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE30％，Acr∶Bis＝29∶1)电泳10～12 h后，银染显色，显示3种基因型(图1)。

两种纯合的基因型各选取3个样本交由上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序。测序结果与MyoG基因原序列比对，发现TT和CC基因型相比在外显子3序列的36bp处有T-C的点突变(图2)，该突变未造成编码氨基酸的改变。

1.4 MyoG基因突变位点对京海黄鸡各周龄体重的遗传效应

配合下列模型分析不同基因型对京海黄鸡各周龄体重的影响：Y＝μ+基因型效应+残差效应。MyoG不同基因型对京海黄鸡各周龄的遗传效应见表1。