[发明专利]树突状细胞及其制备方法和用途

权利要求书

1.树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤性细胞的组合在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或者抑制肝癌，其中，所述树突状细胞特异性识别肝癌病灶，

所述树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤性细胞的组合是通过下列步骤获得的：

(1)获取外周血，所述外周血来自于携带所述病灶的个体，所述个体患有慢性乙肝；

(2)从所述外周血中分离单个核细胞；

(3)用GT-T551培养液重悬所述单个核细胞，获得重悬细胞，将重悬细胞接种于细胞培养瓶中，获得贴壁细胞和悬浮细胞，吸出悬浮细胞，向贴壁细胞中加入巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素4，刺激贴壁细胞向树突状细胞分化，加入乙肝疫苗和甲胎蛋白的组合物，用于刺激贴壁细胞产生抗原特异性，加入IL-β、IL-6、TNF-α的至少之一，获得成熟的树突状细胞，所述甲胎蛋白和所述乙肝疫苗的重量浓度比为1:1；

(4)将悬浮细胞重新接种于培养瓶中,用IFN-γ刺激24小时，再加入CD3单克隆抗体和重组人白细胞介素2，形成细胞因子诱导的杀伤细胞，所述IFN-γ的浓度为1000U/ml，CD3单克隆抗体的浓度为50ng/ml，重组人白细胞介素2的浓度为500U/ml；

(5)将所述树突状细胞和所述细胞因子诱导的杀伤性细胞进行共培养，获得所述树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤性细胞的组合，其中，在所述共培养时，所述树突状细胞与所述细胞因子诱导的杀伤性细胞的接种比例为1：8-12。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤(3)中所述巨噬细胞集落刺激因子的浓度为1000U/mL，所述重组人白细胞介素4的浓度为500U/mL，所述甲胎蛋白和所述乙肝疫苗的浓度分别独立地为40-60微克/毫升。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述树突状细胞与所述细胞因子诱导的杀伤性细胞的接种比例为1：10。