[发明专利]快速检测花生抗旱性的方法及所使用的探针

权利要求书

1.一种花生9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶的探针，其特征在于，所述探针的5’端到3’端的脱氧核苷酸序列为：ATGTCCCCGGAATCTCCATCCTCTCTGT。

2.一种快速检测花生抗旱性的方法，其特征在于：采用如权利要求1所述的花生9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶的探针检测花生的组织中的9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶的基因的相对表达量，根据所述9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶的基因的相对表达量的高低，判定被检测的花生品种的抗旱性的强弱情况。

3.如权利要求2所述的快速检测花生抗旱性的方法，其特征在于：所述花生组织是花生叶片。

4.如权利要求3所述的快速检测花生抗旱性的方法，其特征在于：所述花生叶片为花生四叶期幼苗的叶片。

5.如权利要求4所述的快速检测花生抗旱性的方法，其特征在于：所述花生叶片在对花生植株进行干旱胁迫处理后进行9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶的基因的相对表达量检测。

6.如权利要求5所述的快速检测花生抗旱性的方法，其特征在于：所述干旱胁迫处理时间为2小时。

7.如权利要求5所述的快速检测花生抗旱性的方法，其特征在于：所述花生植株用20％的平均分子量为6000的聚乙二醇进行干旱胁迫处理。

8.如权利要求2所述的快速检测花生抗旱性的方法，其特征在于：所述花生9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶的基因的相对表达量的检测方法为实时定量荧光聚合酶链式反应。

9.如权利要求8所述的快速检测花生抗旱性的方法，其特征在于，所述实时定量荧光聚合酶链式反应的反应体系包括目的基因的探针和引物对，以及内参基因的探针和引物对；

所述目的基因为所述9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶基因，其引物对的5’端到3’端的脱氧核苷酸序列分别为，上游：TTACCTGTGGGATTGTTTGC，下游：ACATGAGCCTCTACTTCTGC；

所述内参基因为18S，其引物对的5’端到3’端的脱氧核苷酸序列分别为，上游：TACGTCCCTGCCCTTTGTAC，下游：CCTACGGAAACCTTGTTACGAC；所述18S的探针的5’端到3’端的脱氧核苷酸序列为：ACACACCGCCCGTCGCTCCTACCGATTGAA。

10.如权利要求9所述的快速检测花生抗旱性的方法，其特征在于，所述实时定量荧光聚合酶链式反应的反应条件为：首先在95℃下保温30秒；然后在如下条件循环40次：95℃保温5秒，降温至60℃保温34秒。

11.如权利要求8所述的快速检测花生抗旱性的方法，其特征在于：所述花生9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶的基因的相对表达量采用2^-ΔΔC_T法进行统计。

12.如权利要求11所述的快速检测花生抗旱性的方法，其特征在于，判定被检测的花生品种的抗旱性的标准为：所述花生9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶的基因的相对表达量大于500的定义为强抗旱花生品种；所述花生9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶的基因的相对表达量为50～500的定义为中等抗旱花生品种；所述花生9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶的基因的相对表达量小于50的定义为弱抗旱花生品种。

13.如权利要求2或12所述的快速检测花生抗旱性的方法，其特征在于：所述花生9-顺式-环氧类胡萝卜素双加氧酶的基因的相对表达量越高，指示被检测的花生品种的抗旱性越强。