[发明专利]一种大肠杆菌突变株及利用该菌生产手性天冬氨酸的方法

权利要求书

1.一种耐盐大肠杆菌突变株，保藏编号为CGMCC No.9288。

2.根据权利要求1所述的耐盐大肠杆菌突变株，其特征在于，所述菌株16S rRNA基因部分片段序列与Seq ID No.1所述一致。

3.一种利用权利要求1所述大肠杆菌突变菌株生产手性天冬氨酸的方法，包括如下的步骤：

(1)、以顺丁烯二酸为原料，在溴化钠与过硫酸铵的催化作用下生成反丁烯二酸沉淀，加氨后使沉淀溶解；

(2)、将CGMCC No.9288菌株发酵培养后获得的具有天冬氨酸酶活性发酵液作为酶源与步骤(1)的溶液混合，经过酶促反应生成L-天冬氨酸；

(3)、调节pH至酸性，回收目标产物L-天冬氨酸。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法步骤(1)中反应条件为温度控制在50-80℃，溴化钠投加量为顺丁烯二酸质量的0.5-5％，过硫酸铵的投加量为顺丁烯二酸的0.5-5％。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法步骤(2)中，CGMCC No.9288菌株接种于pH值为6‐8的发酵培养基中，在15‐35℃温度下培养12-36小时，获得具有天冬氨酸酶活性的发酵液。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法步骤(3)中，反应条件为将溶液pH调节至1.0-6.0,待沉淀完全后过滤得到L-天冬氨酸粗产物。

7.一种利用权利要求1所述大肠杆菌突变菌株进行废水回用工艺生产手性天冬氨酸的方法，包括如下步骤：

(1)、回收利用酶法合成天冬氨酸产生的废液，补加顺丁烯二酸，以及催化剂溴化钠与过硫酸铵生成反丁烯二酸沉淀，加氨后使沉淀溶解；

(2)、将CGMCC No.9288菌株发酵培养后获得的具有天冬氨酸酶活性的发酵液作为酶源与步骤(1)的溶液混合，经过酶促反应生成L-天冬氨酸；

(3)、用顺丁烯二酸调节pH至酸性，回收目标产物L-天冬氨酸。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，该工艺产生的废液可继续采用上述方法步骤进行循环废水回用，直至废水累积的盐浓度不再适合CGMCC No.9288生长为止。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法步骤(1)中，补加的顺丁烯二酸终浓度至100g/L以上。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法步骤(3)中，反应条件为用顺丁烯二酸调节pH至1.0-6.0。