[发明专利]一种深层液态发酵生产安络小皮伞胞外多糖的方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种深层液态发酵生产安络小皮伞胞外多糖的方法。

背景技术

安络小皮伞，学名为Marasmius androsaceus(L.ex Fr.)Fr.别名鬼毛针、茶褐小皮伞等，属于担子菌纲、伞菌目(Agaricales)、白蘑科(ThichoLomataceae)、小皮伞属(Marasmius)。生于深山密林、阴冷潮湿、酸性土壤上面的枯枝上，主要分布于我国吉林、湖南、湖北、广东等省。我国民间早有用野生安络小皮伞的根状菌索来治疗骨折疼痛、跌打损伤等。据广东微生物研究所(1975)报道，该所与广州第一制药厂等用人工发酵培养方法，获得安络小皮伞发酵培养物，再将其浓缩制成的“安络痛胶囊”和药酒，经临床验证600例，证明对三叉神经痛、坐骨神经痛、偏头痛、眶上神经痛、面部神经麻痹、面肌痉挛及风湿性关节炎等均有一定的疗效。对中、轻麻疯神经痛、腰肌劳损等也有一定缓解作用，是对人体安全、无毒副作用的镇痛和抗风湿药物。目前用其制成的药品，除“安络痛胶囊”外，还有“安络痛酊”、“安络痛注射液”和“安络解痛片”等。临床和市场效果很好。近年来的研究表明安络小皮伞的营养保健价值也很高，能促进神经组织和纤维结缔组织的炎症消失，改善局部的血流循环和组织营养状况，恢复神经功能。菌内含有的氨基酸、糖类等成分可以作为食品和保健品的添加成分，对人体的免疫力提高和抗衰老有一定的作用。安络小皮伞其它组分的功能还处于正在研究的阶段。

近年来越来越多的学者开始研究安络小皮伞的药效成分和药理作用,但是目前国内野生的安络小皮伞资源稀少，子实体的人工栽培成功率低且重复性差，固体栽培周期长、污染率高，易受周围环境限制，无法满足日益增长的市场需求。而深层液态发酵技术具有发酵周期短、高产量、污染率低等优点、不受周围环境限制，资源设备利用率高等优点，因而受到越来越多的研究者们的青睐。国内外也有少量大专院校的研究者对安络小皮伞的深层发酵进行过研究，但往往其主要侧重点是如何获取更高的生物量，只有少部分研究者关注安络小皮伞的功效成分多糖的研究，但主要是通过菌丝体提取获取多糖，作为发酵的副产物发酵滤液大都作为废液直接排掉，浪费了大量的宝贵资源，并且增加了环保压力，提升了排污成本。

发明内容

本发明的目的是为了解决工业化规模生产安络小皮伞多糖的技术瓶颈，采用液态发酵生产安络小皮伞多糖克服了固态发酵周期长、投资大、受季节限制、难以产业化等弊端，采用此发明能够连续、自动化、产业化的生产出高品质的安络小皮伞多糖。

为了实现上述目的，本发明主要按照下述步骤进行：

本发明的产业化深层液态发酵生产安络小皮伞胞外多糖的方法包括下述步骤：

一种制备安络小皮伞发酵液的方法，将安络小皮伞种子培养液接入灭菌后的发酵培养基，接种量为10～20％，通风比为1：0.5‐1.5vvm，罐压0.02～0.05Mpa，在22～30℃下发酵培养4‐6天，得到安络小皮伞发酵液；其中所述的发酵培养基配方为：葡萄糖1-3％、淀粉1-3％、酵母粉0.2-1％、玉米浆0.5-2％、磷酸二氢钾0.1-0.5％、七水硫酸镁0.1-0.5％、消泡剂0.01-0.05％、20000u/ml的耐高温α-淀粉酶0.001-0.007％(v/v)，调节pH值6.5-7.5。上述培养基组成中除淀粉酶以外的“％”，均表示g/100ml。

所述的消泡剂可以为植物油(豆油、菜籽油)类、有机醚类等物质。

其中，所述的安络小皮伞种子培养液优选通过以下方法制备得到：

1)一级种子培养：将经活化摇瓶菌种接入灭菌后的液体种子培养基，接种量为0.1～2％，通风比为1：0.5‐1.5vvm，罐压0.02～0.05Mpa，在22～30℃下培养5～6天，得到安络小皮伞一级种子培养液；

2)二级种子培养：将步骤1)所得的一级种子培养液接入灭菌后的液体种子培养基，接种量为10～20％，通风比为1：0.5‐1.5vvm，罐压0.02～0.05Mpa，在22～30℃下培养3～4天，得到所述的安络小皮伞种子培养液。

所述的液体种子培养基配方优选为：葡萄糖2-4％、蚕蛹粉0.1-0.5％、黄豆饼粉1-3％、磷酸二氢钾0.1-0.5％、七水硫酸镁0.1-0.5％、消泡剂0.01-0.05％，调节pH值6.5-7.5。上述培养基组成中的“％”均表示g/100ml。

所述的发酵培养终点为：菌球变碎、滤液浑浊；还原糖降至最低并略有波动，还原糖控制0.3％(g/100g)以下；镜检菌丝细碎，无杂菌污染。