[发明专利]一种深层液态发酵生产安络小皮伞胞外多糖的方法

权利要求书

1.一种制备安络小皮伞发酵液的方法，其特征在于将安络小皮伞种子培养液接入灭菌后的发酵培养基，接种量为10～20％(v/v)，通风比为1：0.5‐1.5vvm，罐压0.02～0.05Mpa，在22～30℃下发酵培养3～5天，得到安络小皮伞发酵液；其中所述的发酵培养基配方为：葡萄糖1-3％、淀粉1-3％、酵母粉0.2-1％、玉米浆0.5-2％、磷酸二氢钾0.1-0.5％、七水硫酸镁0.1-0.5％、消泡剂0.01-0.05％、20000u/ml的耐高温α-淀粉酶0.001-0.007％(v/v)，调节pH值6.5-7.5。

2.根据权利要求1所述的制备安络小皮伞发酵液的方法，其特征在于所述的安络小皮伞种子培养液通过以下方法制备得到：

1)一级种子培养：将经活化摇瓶菌种接入灭菌后的液体种子培养基，接种量为0.1～2％(v/v)，通风比为1：0.5‐1.5vvm，罐压0.02～0.05Mpa，在22～30℃下培养5～6天，得到安络小皮伞一级种子培养液；

2)二级种子培养：将步骤1)所得的一级种子培养液接入灭菌后的液体种子培养基，接种量为10～20％(v/v)，通风比为1：0.5‐1.5vvm，罐压0.02～0.05Mpa，在22～30℃下培养3～4天，得到所述的安络小皮伞种子培养液。

3.根据权利要求2所述的一种制备安络小皮伞发酵液方法，其特征在于所述的液体种子培养基配方为：葡萄糖2-4％、蚕蛹粉0.1-0.5％、黄豆饼粉1-3％、磷酸二氢钾0.1-0.5％、七水硫酸镁0.1-0.5％、消泡剂0.01-0.05％，调节pH值6.5-7.5。

4.根据权利要求1所述的一种制备安络小皮伞发酵液方法，其特征在于所述的发酵培养终点为：菌球变碎、滤液浑浊；还原糖降至最低并略有波动，还原糖控制0.3％以下；镜检菌丝细碎，无杂菌污染。

5.一种安络小皮伞胞外多糖提取的方法，其特征在于该方法包括下述步骤：

1)分离：将权利要求1所得的安络小皮伞发酵培养液经分离，得到安络小皮伞上清液；

2)浓缩：将步骤1)所得的滤液进行采用二级低温浓缩，得到浓缩比重为1.25～1.40的浓缩浆；

3)醇沉、烘干：加入浓缩浆重量3-5倍量的95％酒精，用酒精计检测混合液酒精度约65-80％(v/v)，静置8-16h，将沉淀物进行真空烘干，温度50‐75℃，真空度不低于0.085MPa；烘干至干燥物水分含量为3～8％(g/100g)，即得胞外糖。

6.根据权利要求5所述的安络小皮伞胞外糖的方法，其特征在于所述步骤1)中所述的分离采用卧螺离心机进行，转速控制在2500‐3500r/min。

7.根据权利要求1所述的安络小皮伞胞外糖的方法，其特征在于所述步骤2)中所采用的二级浓缩为：一级采用双效蒸发器浓缩，将发酵液浓缩到比重为1.15‐1.20，二级采用单效浓缩器浓缩，即将比重为1.1‐1.20的浓缩液继续浓缩到比重为1.25～1.40的浓缩浆；浓缩过程均要求控制温度不高于75℃，真空度不低于0.085MPa。