[发明专利]活疫苗的耐热冻干保护剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，具体涉及一种活疫苗的耐热冻干保护剂及其制备方法和应用。

背景技术

病毒等生物活性物质及其相关制品的热敏感性一直是活疫苗长期保存的瓶颈。我国幅员辽阔，经济水平差异较大，运输、使用过程中疫苗短期暴露高温环境(甚至45℃以上)的现象依然存在，所以对活疫苗的耐热性能提出了更高的要求。

耐热冻干保护剂考虑了活疫苗在较高温度和较长保存时间的情况下，冻干物质可能产生的物理和化学变化对活疫苗存活的影响。目前，国内已有部分生物制品在2～8℃条件保存，具有一定的耐热能力，但还有相当一部分生物制品仍处于低温状态保存，尚未开发到2～8℃条件保存。

早在20世纪80年代发达国家就已开始进行耐热保护剂的研究，目前他们的冻干活疫苗基本上使用耐热保护剂，而且保护剂的研究和应用属于专利资料，各国都处于保密状态。国内兽用生物制品耐热保护剂的研究起步较晚，近年来关于这方面的研究报道主要包括鸡新城疫、鸡传染性法氏囊、鸡马立克氏病、鸡传染性支气管炎、鸡痘和猪瘟冻干活疫苗的耐热保护剂研究，但尚未见猪乙型脑炎活疫苗耐热冻干保护剂的相关报道。

另外，猪乙型脑炎活疫苗免疫机体后主要以细胞免疫为主，所以在进行抗体监测时，抗体上升的晚并持续的时间短，经常会有免疫猪乙型脑炎活疫苗不久后暴发乙型脑炎病的情况。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种活疫苗的耐热冻干保护剂及其制备方法和应用，以降低疫苗对温度保存条件的要求，同时提高和延长免疫动物的抗体水平。

基于上述目的，本发明提供的活疫苗的耐热冻干保护剂由明胶、蔗糖、Trolox、精氨酸、聚乙烯吡咯烷酮和注射用水组成。

可选地，所述活疫苗的耐热冻干保护剂由以下原料按重量配比组成：

明胶1～10％，蔗糖2～10％，Trolox0.01～0.2％，精氨酸0.1～2％，聚乙烯吡咯烷酮0.5～8％，余量为注射用水。

优选地，所述活疫苗的耐热冻干保护剂由以下原料按重量配比组成：

明胶4～7％，蔗糖4～6％，Trolox0.05～0.15％，精氨酸0.5～1.5％，聚乙烯吡咯烷酮1～2％，余量为注射用水。

本发明还提供制备上述活疫苗的耐热冻干保护剂的方法，所述制备方法是：

将明胶、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮依次溶于注射用水中，然后将溶液灭菌；

将Trolox、精氨酸依次溶于注射用水中，然后将溶液过滤除菌；

将所述灭菌后的溶液和所述过滤除菌后的溶液混合，即得到所述活疫苗的耐热冻干保护剂。

较佳地，所述活疫苗的耐热冻干保护剂的制备方法是：

将明胶、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮依次溶于注射用水中，然后于110～130℃条件下将溶液灭菌10～40分钟；

将Trolox、精氨酸依次溶于注射用水中，然后采用0.2～0.25μm滤膜将溶液过滤除菌；

将所述灭菌后的溶液和所述过滤除菌后的溶液的温度分别恢复到20～30℃后，再混合均匀，即得到所述活疫苗的耐热冻干保护剂。

本发明还提供上述活疫苗的耐热冻干保护剂在活疫苗制备中的应用，所述活疫苗为猪乙型脑炎活疫苗。

较佳地，所述应用包括：

将所述活疫苗的耐热冻干保护剂与猪乙型脑炎活疫苗病毒液按照体积比0.5～2:1～2混合；

将混合溶液的pH值调至7.5～7.8后进行冷冻干燥，即得到猪乙型脑炎耐热冻干保护剂活疫苗。

优选地，所述冷冻干燥的步骤包括：

1)将活疫苗在常压、温度为-30℃以下的条件下保持1～3小时；

2)将活疫苗在真空度为5～15Pa、温度为-20～-15℃条件下保持20～40分钟；

3)将活疫苗在真空度为5～15Pa、温度为-10～-5℃条件下保持10～15小时；

4)将活疫苗在真空度为5～15Pa、温度为-2～2℃条件下保持1～3小时；

5)将活疫苗在真空度为5～15Pa、温度为8～12℃条件下保温1～3小时；

6)将活疫苗在真空度为5～15Pa、温度为25～30℃条件下保温8～12小时；

在步骤2)～步骤6)的冻干过程中，冷凝器温度保持在-50～-70℃。

较佳地，所述猪乙型脑炎病毒效价≥10^7.5TCID₅₀/mL。

较佳地，先将所述耐热冻干保护剂和猪乙型脑炎病毒液的温度分别恢复到15～20℃，再混合均匀。